Aproximación al Estudio Diagnóstico Genético PARTE 1 Autores Dr. Esteban A. San Martín L.

Transcripción

1 Aproximación al Estudio Diagnóstico Genético PARTE 1 Autores Dr. Esteban A. San Martín L. CERPO Centro de Referencia Perinatal Oriente Facultad de Medicina, Universidad de Chile

2 Temario INTRODUCCIÓN CARIOGRAMA FISH MLPA ARRAY CGH SECUENCIACIÓN CONSEJO GENÉTICO

3 Propósito de la Genética Clínica Dar atención de salud integral (promoción, prevención, diagnóstico, asesoramiento y manejo que contemple tanto la supervisión de salud como el seguimiento) a los pacientes de cualquier grupo etario y familias con sospecha, riesgo o diagnóstico establecido de una enfermedad con componente genético y/o anomalías congénitas, en el nivel secundario y terciario.

4 Clasificación de enfermedades geneticas Cromosómicas - Numéricas (triploidía, monosomía, trisomía ) - estructurales (traslocaciones, inversiones,anillos, deleciones, duplicaciones ) Monogénicas - Autosómicas:dominantes recesivas - Ligadas al X: D Y R Multifactoriales Mitocondriales y otras de herencia no clásica

5 Incidencia de alteraciones cromoso micas constitutionales 6 por nacimientos Alteraciones de cromosomas sexuales: 2/1.000 Trisomi a 21: 1,5/1.000; otras alteraciones autoso micas desbalanceadas: 0,5/ Alteraciones cromoso micas balanceadas con un fenotipo normal 2/1.000

6 Alteraciones cromosómicas

7 Pe rdida reproductiva Entre embarazos conocidos: 150 abortara n esponta neamente: 100 tendra n una constitucio n cromoso mica anormal : 20 si ndrome de Turner, 20 trisomi a 16 y 20 triploidi as Los humanos tendri an la tasa ma s alta de gametos anormales (so lo una de cada 2 concepciones llegari a a te rmino).

8 Impacto de las enfermedades genéticas y anomalías congénitas Abortos espontáneos % anomalía cromosómica Mortinatos anomalía congénita 6 % anomalía cromosómica Recién nacidos 3% al menos una anomalía congénita ~1 % anomalía cromosómica Modificado de Thompson & Thompson 2007

9 Tasas por 1000 Nacidos Vivos Mortalidad Infantil en Chile Grupos de Causas Seleccionadas 40 RESPIRATORIAS GASTROINTESTINALES DESNUTRICIÓN 30 ANOMALÍAS CONGÉNITAS Años MINSAL, DEIS: 7,41 por 1000 RNV 2010

10 Edad Materna

11 Viabilidad de alteraciones cromoso micas Trisomi a % Trisomi a % Trisomi a % Monosomi a X 0-2% (Emery, 1995)

12 TÉCNICAS DE ESTUDIO EN CITOGENÉTICA Cariotipo FISH Cariotipo espectral (SKY) / M-FISH Array CGH

13 Caso Clínico RN: E.A.C.B. F. Nac. : Sexo: Femenino Edad gestacional al parto: 36 sem Parto: Cesárea de Urgencia Edad Madre: 29 Edad Padre: 29

14 Caso Clínico Embarazo controlado Exámenes control prenatal normales. VDRL y VIH (-) Eco 12 semanas: LCF (+) TN: 9.9 mm. Hueso nasal presente. Higroma quístico. Se ofrece Cariograma en L.A.

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16 Caso Clínico Eco CERPO 36+5: Gestación única, RCIU, OHA Tetralogía de Fallot Hipoplasia del hueso nasal Imagen de doble burbuja Quiste renal izquierdo Doppler fetal alterado Ecocardiografía prenatal informa: Tetralogía de Fallot con Obs. DSVD tipo Fallot Cayado aórtico Derecho amplio

17 Caso Clínico Se indica cesárea por Doppler fetal alterado E.G. : 36 sem P.N. : 1705 grs T.N. : 40 cms C.C. : 30 cms APGAR: 3 5 7

18 Caso Clínico Al nacer no se logra pasar sonda por fosas nasales, por bradicardia y esfuerzo irregular se intuba y traslada a UCIN. Atresia de Coanas. Ecocardio: DSVD tipo Fallot, Fo amplio, DAP 2 mm. Hiperbilirrubienamia: fototerapia por 3 días. Hipertrigliceridemia: manejo farmacológico. Eco abdominal con quiste cortical renal simple. Función renal y diuresis normal.

19 Caso Clínico Diagnósticos: 1. RNPT 36 sem PEG severo 2. DSVD tipo Fallot, FO amplio 3. Alteración cromosómica en estudio 4. Atresia de Coanas 5. Quiste renal izquierdo simple 6. Hiperbilirrubinemia tratada 7. Hipertrigliceridemia

20 Cariotipo El cariotipo es la constitucio n cromoso mica de un individuo y es un estudio de rutina en gene tica me dica. Los cariotipos se pueden informar presentando todos los pares cromoso micos ordenados de acuerdo a su taman o. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se sen ala por separado para indicar el sexo del individuo.

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22 Indicaciones de cariotipo Durante el embarazo Tejidos: ce lulas de li quido amnio tico obtenidas por amniocentesis, vellosidades coriales, linfocitos obtenidos por cordocentesis. Indicaciones: Edad materna avanzada Embarazo anterior con una constitucio n cromoso mica aberrante Mortinato previo con una constitucio n cromoso mica alterada

23 Indicaciones de cariotipo Durante el embarazo Reordenamiento cromoso mico balanceado o no en uno de los padres Test de tamizaje en suero materno anormal Ultrasonido fetal anormal

24 Indicaciones de cariotipo Durante el peri odo perinatal: mortinato Cariotipo en fibroblastos (cordo n umbilical, pulmo n, mu sculo) si la etiologi a es desconocida o si se sospecha una enfermedad cromoso mica (por ejemplo en si ndromes dismo rficos y/o con anomali as viscerales); esta indicado un completo examen anatomopatolo gico.

25 Cariotipo Puede ser realizado en linfocitos perife ricos, ce lulas tumorales (me dula o sea), fibroblastos, gametos, amniocitos o trofoblasto segu n indicaciones. Es capaz de informar alteraciones sobre 5-10 MB Es inespecífico Bajo costo en comparación a tecnologías más recientes

26 Muestras para diagno stico citogene tico Vellosidades coriales (trofoblasto): Frasco este ril con tapa rosca. Agregar suero fisiolo gico y heparina de sodio. Con embrio n vivo en frasco con medio de cultivo del laboratorio. Li quido amnio tico, li quido del higroma qui stico, orina fetal, derrames pleural, perica rdico o peritoneal : Tubo este ril con tapa rosca sin aditivos. Sangre de cordo n o venosa y me dula o sea: Jeringa o tubo con heparina de sodio. Piel, ganglios, tumores : Frasco este ril con tapa rosca. Agregar suero fisiolo gico y heparina de sodio. Mortinato: li quido amnio tico, sangre, trofoblasto, piel y tendo n. Todas las muestras pueden guardarse a 4 C.

27 Cariotipo Un mito geno (PHA) estimula el crecimiento celular (linfocitos), las mitosis son bloqueadas en metafase por un to xico del huso (colchicina), una solucio n hipoto nica dispersa los cromosomas y las te cnicas de bandeo revelan el nu mero de bandas sucesivas en cada cromosoma.

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29 Cariotipo

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31 vvvv Cariotipo

32 Cariotipo

33 vvvv Cariotipo

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35 Cariograma del caso clínico

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37 Cariograma paciente?

38 Cariotipo Progenitor 46,XY,t(6;13)(p21.2;q34)

39 Cariograma Progenitor 46,XY,t(6;13)(p21.2;q34)

40 Segregación Cromosómica Adyacente 2 (centrómeros del mismo cromosoma) Adyacente 1 (centrómeros distintos)

41 Segregación Cromosómica NORMAL BALANCEADO DELECIÓN 6p DUPLICACIÓN 6p

42 Cariograma paciente 46,XY,der(13)t(6;13)(p21.2;q34)pat

43 ANOMALIAS ESTRUCTURALES Pueden ser: Balanceados: redistribución no produce pérdida ni aumento de material cromosómico. Desbalanceado: redistribución causa pérdida o aumento de material cromosómico

44 ANOMALIAS ESTRUCTURALES 1- Deleción: - terminal - intersticial 2- Duplicación:- directa o en tandem - invertida o en espejo 3- Inversión:- pericéntrica cuando incluye el centrómero - paracéntrica cuando ocurre dentro de un brazo cromosómico 4- Isocromosoma: puede ser del brazo p o q 5- Cromosoma en anillo: se pierden los telómeros y se forma un aro o anillo

45 ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS Anomalías Numéricas Poliploidías Aneuploidías autosómicas Aneuploidías de los cromosomas sexuales Anomalías Estructurales Translocaciones Deleciones y Microdeleciones Duplicaciones, cromosomas en anillos, inversiones, isocromosomas

46 ANOMALÍAS NUMÉRICAS Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo de 23. (eu: bueno ploid: conjunto)

47 ANOMALÍAS NUMÉRICAS Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo de 23. (eu: bueno ploid: conjunto) Poliploide: presencia de un set completo de cromosomas adicionales en una célula.

48 ANOMALÍAS NUMÉRICAS Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo de 23. (eu: bueno ploid: conjunto) Poliploide: presencia de un set completo de cromosomas adicionales en una célula.

49 ANOMALÍAS NUMÉRICAS Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo de 23. (eu: bueno ploid: conjunto) Poliploide: presencia de un set completo de cromosomas adicionales en una célula.

50 POLIPLOIDÍAS Anomalías Numéricas Triploidía: 69 cromosomas La gran mayoría se abortan en forma espontánea Fecundación de un óvulo por dos espermios (dispermia) Fusión de un ovocito con un corpúsculo polar y la posterior fecundación por el espermatozoide Falla meiótica en la formación del espermatozoide o del ovocito Tetraploidía: 92 cromosomas

51 ANOMALÍAS NUMÉRICAS Euploide: célula con número de cromosomas múltiplo de 23. (eu: bueno ploid: conjunto) Poliploide Aneuploide: célula que no presenta un número de cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o ganancia de cromosoma(s) Aneuploidía autosómica Aneuploidía de los cromosomas sexuales

52 ANEUPLOIDÍAS Anomalías Numéricas Las células no presentan un número de cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o ganancia de cromosoma(s) autosómico(s). Monosomía Trisomía

53 Aneuploidías autosómicas Anomalías Numéricas Las células no presentan un número de cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o ganancia de cromosoma(s) autosómico(s). Monosomía Trisomía

54 Aneuploidías autosómicas Anomalías Numéricas Las células no presentan un número de cromosomas múltiplo de 23, por pérdida o ganancia de cromosoma(s) autosómico(s). Monosomía Trisomía

55 Aneuploidías autosómicas Anomalías Numéricas La causa más frecuente es la ausencia de disyunción.

56 Aneuploidías autosómicas Anomalías Numéricas Trisomía 21 47,XX,+21 1 en RN vivos RM e Hipotonía Características faciales Piel de la nuca redundante Surco palmar único Clinodactilia Cardiopatía congénita Alteraciones Gastrointestinales

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58 Limitaciones del ana lisis citogene tico No pueden descartarse: Mosaicismo de bajo nivel Reordenamientos muy pequen os Enfermedades gene ticas que no son discernibles con me todos citogene ticos

59 Reunión CERPO FIN PARTE 1