Métodos de diagnóstico prenatal genético. Raluca Oancea MIR 4º -Análisis Clínicos

Transcripción

1 Métodos de diagnóstico prenatal genético Raluca Oancea MIR 4º -Análisis Clínicos

2 Usos del diagnóstico prenatal: Para que los padres tomen una decisión Tratamiento clínico Tratamiento prenatal Atención del recién nacido Consideraciones obstétricas

3 Introducción:

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5 Cariotipo normal 46XX (mujer)

6 Cariotipo normal 46XY (hombre)

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8 Gen (segmento de ADN que contiene la información para sintetizar una cadena peptídica) Genotipo (constitución genética de un individuo) Fenotipo (apariencia, física, bioquímica y fisiológica de un individuo, que es resultado de la interacción del ambiente y del genotipo) Locus genético Alelos dominante recesivo codominante Homocigoto Heterocigoto Conceptos fundamentales:

9 Enfermedades hereditarias Malformaciones congénitas Mendeliana. Monogénica (AD,AR,LX) Cromosómica (numéricas, estructurales) Multifactorial (poligénica, predisposición) Esporádica. Ambiental. Desconocida

10 Frecuencias de las enfermedades genéticas Monogénica Dominante % Recesiva % Ligada al x % Cromosómica 0.7 % Enfermedad común % Malformación congénita % Total 4 5 %

11 Edad de riesgo Screening1ºT Hallazgos Antecedentes >35 años alto riesgo ecográficos familiares y personales APP Técnicas de reproducción asistida Otras Consulta Genética Consejo genético Decisión por parte de la pareja / Consentimiento informado Pruebas diagnósticas? Cultivo celular Bandeo cromosómico Estudio microscópico Cariotipo fetal y/o NO SI FISH (21,13,18,X,Y) Estudio microscópico Estudio molecular

12 Diagnóstico prenatal Ultrasonidos No invasivo Muestra de sangre materna 3-4 D S Invasivo Diagnóstico previo a la implantación Muestra de vellosidades coriónicas S Amniocentesis Fetoproteína alfa +18 S Muestra de sangre fetal

13 Diagnóstico previo a la implantación Alt. cromosómicas Enf. monogénicas

14 Muestra de Amniocentesis vellosidades coriónicas Muestra de sangre fetal

15 Técnicas invasivas para diagnóstico prenatal Biopsia corial <1% Etapa más temprana Amniocentesis <0,5% Medir AFP Más experiencia Cordocentesis 1-2% Resultado ràpido Estudio DNA Mosaicismo Precisión menor del estudio Sensibilización Rh Cultivo lento Se cuenta con poco tiempo para repetirse Más difícil de realizar

16 Técnicas utilizadas Citogénetica convencional Cultivo celular Bandeo cromosómico Estudio microscópico Cariotipo fetal Citogénetica molecular FISH (21,13,18,X,Y) Estudio microscópico QF -PCR Estudio molecular directo e indirecto Enf. monogénicas

17 CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO? Cultivo a 37ºC /subcultivo (añadir colchicina) Sacrificio del cultivo (choque osmótico; KCL) Fijación (Carnoy) Extensión y Tinción (Giemsa) Envejecer Bandeo

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19 Caso 1. Screening de 1º trimestre de alto riesgo para el Sdr. Down.

20 Caso 2. Hallazgos ecográficos

21 Caso 3. Edad de riego(37 años).

22 Técnicas utilizadas Citogénetica convencional Cultivo celular Bandeo cromosómico Estudio microscópico Cariotipo fetal Citogénetica molecular FISH (21,13,18,X,Y) Estudio microscópico QF -PCR Estudio molecular directo e indirecto Enf. monogénicas

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25 Painting/SKY

26 Cromosomas 13/21

27 QF - PCR

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29 DIAGNOSTICO GENÉTICO PRENATAL ESTUDIO MOLECULAR Directo LÍQUIDO AMNÍOTICO (sem ) Biopsia corial (sem 12-14) Indirecto DTEREMINACIÓN DEL SEXO FETAL (PCR) EXTRACCIÓN DNA Secuenciación Real time quantitative PCR MUTACIÓN STRS COMPATIBILIDAD MUESTRA - PACIENTE Multiplex fluorescent analysis of STRs

30 Diagnóstico prenatal Ultrasonidos No invasivo Muestra de sangre materna 3-4 D S Invasivo Diagnóstico previo a la implantación Muestra de vellosidades coriónicas S Amniocentesis Fetoproteína alfa +18 S Muestra de sangre fetal

31 Muestra de sangre materna Ácidos nucleicos fetales Células fetales

32 Células fetales en sangre materna : Trofoblastos? Linfocitos fetales? Eritroblastos fetales? FACS MACS

33 ADN fetal (<0.5%) ADN materno

34 Cariotipo masculino normal,46 XY Sexo fetal masculino

35 DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL (Gen SRY) EN EL PLASMA MATERNO ENFERMEDADES LIGADAS AL X (HEMOFILIAS) DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL EN EL PLASMA MATERNO (Sem. 10) SEXO MASCULINO SEXO FEMENINO Biopsia corial/amniocentesis para el diagnóstico prenatal STOP

36 DETERMINACIÓN DEL RH FETAL EN EL PLASMA MATERNO Gestante RH negativa, Incompatibilidad RH? DETERMINACIÓN DEL RH FETAL EN EL PLASMA MATERNO (a partir sem. 15) RH positivo RH negativo Amniocentesis para la determinación del RH fetal? En caso de feto Rh negativo: se descarta EHRN, se evitan pruebas invasivas se evita administración de la gammaglobulina anti D

37 Marco legal, problemas éticos El artículo 417 bis del Código Penal «1. No será punible el aborto practicado por un médico, o bajo su dirección, en centro o establecimiento sanitario, público o privado, acreditado y con consentimiento expreso de la mujer embarazada, cuando concurra alguna de las circunstancias siguientes: 1.ª Que sea necesario para evitar un grave peligro para la vida o la salud física o psíquica de la embarazada y así conste en un dictamen emitido con anterioridad a la intervención por un médico de la especialidad correspondiente, distinto de aquél por quien o bajo cuya dirección se practique el aborto.en caso de urgencia por riesgo vital para la gestante, podrá prescindirse del dictamen y del consentimiento expreso. 2.ª Que el embarazo sea consecuencia de un hecho constitutivo de delito de violación del artículo 429, siempre que el aborto se practique dentro de las doce primeras semanas de gestación y que el mencionado hecho hubiese sido denunciado. 3.ª Que se presuma que el feto habrá de nacer con graves taras físicas o psíquicas, siempre que el aborto se practique dentro de las veintidós primeras semanas de gestación y que el dictamen, expresado con anterioridad a la práctica del aborto, sea emitido por dos especialistas ser centro o establecimiento sanitario, público o privado, acreditado al efecto, y distintos de aquél por quien o bajo cuya dirección se practique el aborto. 2. En los casos previstos en el número anterior, no será punible la conducta de la embarazada aún cuando la práctica del aborto no se realice en un centro o establecimiento público o privado acreditado o no se hayan emitido los dictámenes médicos exigidos.»

38 Gracias por su atención