Dra. Natàlia Casamitjana
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- Adrián Farías Quintero
- hace 8 años
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1 VALIDACIÓN DE LA DETERMINACIÓN DEL RNA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C, RNA DEL VIH-1 Y DNA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EN LECHE HUMANA MEDIANTE UN SISTEMA AUTOMÁTICO DE AMPLIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS Dra. Natàlia Casamitjana
2 Cribado de los agentes de transmisión parenteral en sangre y tejidos cribado serológico cribado NAT VHC anti-vhc RNA VHC VIH-1/2 anti-vih 1/2 RNA VIH-1 VHB HBsAg DNA VHB Sífilis (Treponema pallidum) anti-t. pallidum HTLV I/II anti-htlv I/II Chagas (Trypanosoma cruzi) (área endémica) anti-t. cruzi
3 Cribado NAT Sistema automático: Tigris Tres marcadores juntos (1 solo resultado): RNA VHC, RNA VIH-1, DNA VHB. Procesamiento individual de las muestras Muy buena sensibilidad HCV RNA HBV RNA HIV-1 RNA 3.6 IU/mL 8.5 IU/mL 52 IU/mL Objetivo: validar si la leche es una matriz susceptible de ser analizada mediante los Tigris, y si es así, determinar la sensibilidad para los 3 marcadores virales.
4 Criterios de aceptación de la validación I 2 técnicas NAT: Sistema ULTRIO TIGRIS (cribado de rutina) Técnica NAT in-house (discriminación/confirmación de resultado NAT+) a.- Porcentaje de inhibiciones del control interno: Para NAT TIGRIS, se evaluó la leche materna y la leche diluida 1:2 en suero fisiológico (180 muestras en total). Se aceptó un porcentaje de inválidos del 1% como máximo en la técnica NAT TIGRIS, y del 10% en la técnica NAT in-house. b.- Fallo de los equipos TIGRIS c.- Sensibilidad: La sensibilidad se determinó por comparación simple en paralelo de 6 diluciones seriadas 1:10 de muestra positiva para HCV, y diluciones 1:2 de muestras positivas para HBV y HIV-1, en leche materna y en plasma.
5 Criterios de aceptación de la validación II c.- Sensibilidad: Como end-point, se consideró la última dilución positiva para cada marcador y matriz. Se aceptó una sensibilidad en leche no inferior a 1 logaritmo a la del plasma. HCV: NAT TIGRIS NATIN-HOUSE HIV-1: 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 HBV: 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280
6 Resultados I a.- Porcentaje de inhibiciones del control interno: Para la técnica NAT TIGRIS, la matriz de leche materna no presentó ninguna muestra inválida (0 %) por inhibición del control interno de las 180 muestras analizadas. Para la técnica NAT in-house, las inhibiciones fueron las siguientes: PCR DNA VHB: 0 de 8 (0%) RT-PCR RNA VIH-1: 0 de 8 (0%) RT-PCR RNA VHC: 3 de 8 (38%) Total inhibiciones: 3 de 24 (12.5%) b.- Fallo de los equipos TIGRIS No se produjo ningún ensayo inválido o fallo de los equipos debido a la matriz de leche materna.
7 Resultados II c.- Sensibilidad: NAT TIGRIS Dilución Marcador Nº replicados Nº POS leche leche (%POS) Nº replicados Nº POS plasma plasma (%POS) 10-2 RNA VHC RNA VHC RNA VHC RNA VHC RNA VHC RNA VHC :40 RNA VIH :80 RNA VIH :160 RNA VIH :320 RNA VIH :640 RNA VIH :1280 RNA VIH :40 DNA VHB :80 DNA VHB :160 DNA VHB :320 DNA VHB :640 DNA VHB :1280 DNA VHB
8 Resultados III c.- Sensibilidad: NAT in-house para leche Dilución Marcador TIGRIS %POS Nºreplicas in-house NºPOS 10-2 RNA VHC RNA VHC RNA VHC RNA VHC 2 0 1:40 RNA VIH :80 RNA VIH :160 RNA VIH :320 RNA VIH :40 DNA VHB 2 2 1:80 DNA VHB :160 DNA VHB :320 DNA VHB In-house %POS
9 Conclusiones 1. La LH es una matriz aceptable para el sistema automático TIGRIS. 2. La sensibilidad obtenida en la leche en el sistema Tigris es similar a la del plasma para VHC, y no excede el logaritmo para VIH-1 y VHB. 3. El sistema TIGRIS ofrece mayor trazabilidad y rendimiento en el cribado de LH que la técnica in-house. 4. El sistema TIGRIS es óptimo para la detección de estos virus directamente en leche humana, tanto como control de calidad del producto como para obviar la muestra de seguimiento de la donante.
10 VALIDACIÓN DE LA DETERMINACIÓN DEL RNA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C, RNA DEL VIH-1 Y DNA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B EN LECHE HUMANA MEDIANTE UN SISTEMA AUTOMÁTICO DE AMPLIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS Natalia Casamitjana, Maria Piron, Gemma Valeta, Pilar Ortiz, Robert Fernandez, Lluis Puig, Monica Coderch, Marta Lopez, Montse Gabarro, Enri Azofra, Marian Martinez, Astrid Jorda, Mar Lopez, Eva Blanco, Marta Espelt, Silvia Sauleda
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