Este Trabajo de Tesis se lo Dedico a mis Padres, Esposo y Hermanas. Prueba de mi esfuerzo.

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1 UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE QUERÉTARO FACULTAD DE QUÍMICA MAESTRÍA EN CIENCIA Y TECNOLOGÍA DE ALIMENTOS EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL FRIJOL (Phaseolus vulgaris) Y DEL CHILACAYOTE (Cucurbita ficifolia) SOBRE LOS NIVELES DE LA PROTEÍNA TGF-ß 1 RELACIONADA CON LA ALTERACIÓN RENAL EN RATAS DIABÉTICAS Presenta Tania Irasema Ambriz Escudero Dirigido por Dra. Rosalía Reynoso Camacho C.U. Santiago de Querétaro, Qro., Julio de 2007

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3 Este Trabajo de Tesis se lo Dedico a mis Padres, Esposo y Hermanas. Prueba de mi esfuerzo.

4 AGRADECIMIENTOS A mis padres quienes me infundieron la ética, la fuerza y disciplina que guían mi vida. A Alonso por su comprensión y apoyo incondicional durante los años que le dediqué a este trabajo de Tesis. A mis hermanas por confiar en mí y en especial a Saraí quien para mí será por siempre mi hermana y de quien aprendí lecciones que jamás olvidaré. A mi Directora de Tesis: Dra. Rosalía Reynoso Camacho, por su asesoramiento científico y estímulo para seguir creciendo intelectualmente. A mis sinodales por su disposición permanente e incondicional en aclarar mis dudas y por sus substanciales sugerencias durante la redacción de la Tesis. A mis compañeras de laboratorio por sus enseñanzas, su fundamental ayuda y por su cariño, siempre ocuparán un rinconcito en mis afectos. Al INIFAP por su valiosa colaboración y buena voluntad en las actividades de laboratorio y por su hospitalidad en todo momento. A todas aquéllas personas pertenecientes al Posgrado en Alimentos quienes directa o indirectamente me apoyaron para que continuara con mis estudios a pesar de las adversidades.

5 RESUMEN Una diabetes mal controlada puede originar el desarrollo de la nefropatía diabética (ND), principal causa de mortalidad por diabetes en muchos países. En relación a esto, un control estricto de los niveles de glucosa complementado con un sistema antioxidante podría ser suficiente para disminuir tales complicaciones. Aunque ya se ha demostrado que el chilacayote (Cucurbita ficifolia) y el frijol (Phaseolus vulgaris) tienen el potencial para disminuir la hiperglicemia, muy poco se conoce acerca del posible efecto que pudieran tener sobre la aparición del daño renal, así como su relación con una citosina proinflamatoria denominada TGF-ß 1. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de la preparación acuosa de frijol y del chilacayote sobre los niveles de la proteína TGF-ß 1 y su relación con el daño renal en ratas diabéticas inducidas con estreptozotocina. Para ello, el desarrollo de la investigación fue realizado en dos etapas. La primera consistió en determinar la relación entre el daño renal y la expresión de TGF-ß 1, medida por la técnica de Elisa, en ratas Wistar diabéticas, así como la relación de esta proteína con el progreso de la enfermedad. Se demostró que existe una relación del desarrollo de la diabetes con el incremento en la concentración de glucosa sanguínea ( %), pérdida de peso ( %), glucosuria ( %), albuminuria ( %), reabsorción de sodio (21-74 %) y el nivel de TGF-ß 1 sérico ( %), comparados con los presentados por los animales sanos. A su vez, se demostró que existe una correlación directa estadísticamente significativa del incremento en la concentración de glucosa sanguínea con el peso de los animales (37.9 %), la glucosuria (39.1 %), microalbuminuria (35.5 %), sodio urinario (44.9 %) y potasio urinario (46.2 %). No fue posible establecer la correlación entre la glucemia y los niveles de TGF-ß 1 sérico y tampoco fue posible observar alteraciones histopatológicas de los riñones de las ratas diabéticas. En cuanto a la microalbuminuria y TGF-ß 1 se refiere, los resultados indican que los animales diabéticos se encuentran en un mayor riesgo de desarrollar alguna nefropatía a futuro. La segunda etapa consistió en el evaluar el efecto agudo del chilacayote y del frijol sobre la glicemia de los animales diabéticos observándose un efecto hipoglucemiante solamente con el frijol. Los animales diabéticos fueron tratados con harina de frijol cocido incorporado a la dieta durante 39 días. El frijol, mostró una disminución (26.6 %) de las concentraciones de glucosa plasmática en ratas diabéticas en comparación con el grupo control, esta tendencia también fue observada en el nivel de albúmina urinaria (40.8 %) y consumo de alimento (34.8 %), Na + y K + urinario. Los niveles de ambos iones alcanzaron los niveles determinados en los animales sanos. Con respecto a los niveles de HDL en suero, el tratamiento con el frijol común aumentó dicha concentración (70 %) en los animales diabéticos. Sin embargo, no se observó ninguna disminución en los niveles de TGF-ß 1. Estos resultados sugieren que el tratamiento con el frijol disminuye los niveles de glucosa en sangre y regula positivamente algunos parámetros relacionados con etapas tempranas de la nefropatía diabética. Palabras clave: Diabetes, frijol, daño renal.

6 ABSTRACT Diabetes poorly controlled can originate the development of diabetic nefrophaty (DN), main cause of mortality by this disease in many countries. In this regard, a strict control of glucose levels complemented with an antioxidant system could be enough to diminish these complications. Although it has been demonstrated that chilacayote (Cucurbita ficifolia) and common bean (Phaseolus vulgaris) have the potential for diminishing the hyperglicemia, very little is known about their role in delaying the onset of the renal damage, as well as their effect on the proinflammatory cytosine TGF-ß 1. Therefore, the aim of this work was to determine the effect of the common bean and chilacayote on the levels of blood glucose and its relation with the renal failure in diabetic rats. Therefore, the present study was made in two stages. First, we persued to determine the relation between the renal damage and the expression of TGF-ß 1, measured by the technique of Elisa, in streptozotocininduced diabetic Wistar rats, as well as its relation with the progression of the disease. The results showed a positive relationship between the development of the diabetes, measured as blood glucose levels ( %), with loss of weight ( %), glucosuria ( %), albuminuria ( %), sodium reabsorption (21-74 %) and the serum TGF-ß 1 level ( %); all these parameters were greater in comparison with the levels presented by the healthy animals. In turn, there was demonstrated that there exists a direct statistically significant correlation of the increase in the concentration of blood glucose with the loss of weight (37.9 %), the glucosuria (39.1 %), microalbuminuria (35.5 %), urinary sodium (44.9 %) and urinary potassium (46.2 %). It was not possible to establish the correlation between the glycemia and serum TGF-ß 1 levels and it was not also possible to observe histopatologic alterations of the kidneys of the diabetic rats. With regards to albuminuria and TGF-ß 1 levels, the results indicate that diabetic animals are in a greater risk of developing some nefrophaty in the future. The second stage consisted of evaluating the acute effect of chilacayote and common bean on glycemia in diabetic animals, showing a hipoglycemic effect only with common bean. Diabetic animals were treated with cooked bean incorporated in the diet during 39 days. Common bean showed a decrease (26.6 %) in blood glucose level of diabetic rats in comparison with the control group. This trend was also observed for urinary albumin level (40.8 %), food intake (34.8 %), urinary Na + and K +. Interestingly the levels of both ions reached levels determined in healthy animals. With regards to serum HDL levels, the treatment with common bean increased this parameter (70 %) in diabetic animals. Nevertheless, a decrease in TGF-ß 1 levels was not observed. These results suggest that treatment with common bean diminishes the levels of blood glucose and this effect might regulate parameters related to early stages of the diabetic nefrophaty. Key words: diabetes, common bean, renal failure.

7 ÍNDICE Contenido Página ÍNDICE i ÍNDICE DE FIGURAS vi I. INTRODUCCIÓN 1 II. ANTECEDENTES 3 II.1 Diabetes mellitus 3 II.2.1 Definición 3 II.2.2 Prevalencia 3 II.2.3 Clasificación de diabetes mellitus 3 II Diabetes tipo 1 3 II Diabetes tipo 2 4 II.2.4 Cuadro clínico de la diabetes 5 II.2.5 Complicaciones de la diabetes tipo 2 5 II.1. Anatomía y fisiología del riñón 6 II.2. Nefropatía diabética 7 II.3.1 Pruebas de diagnóstico para la nefropatía diabética 8 II.3.2 Patogénesis de la nefropatía diabética 9 II.3. El factor de crecimiento transformante beta (TGF-ß) y su función biológica 14 II.4.1 Mecanismo de señalización de TGF-ß a través de las proteínas Smads 15 II.4.2 TGF-ß y su relación con la nefropatía diabética 16 II.4. Plantas antidiabéticas empleadas en la medicina tradicional 18 mexicana II.5.1 Phaseolus vulgaris y la diabetes 18 II.5.2 Cucurbita ficifolia Bouché y la diabetes 19 II.5. Regulación de TGF- ß 1 por los componentes de estos alimentos 21 III. HIPÓTESIS 22 i

8 IV. OBJETIVOS 23 General 23 Particulares 23 V. METODOLOGÍA 24 V.1. MATERIALES 24 V.1.1 Biológicos 24 V.1.2 Químicos 24 V.2. MÉTODOS 25 V.2.1 Animales 25 V.2.2 Inducción de diabetes a ratas Wistar 25 V.2.3 Determinación de glucosa 25 V.2.4 Evaluación del daño renal en ratas diabéticas 26 V Determinación de glucosa, microalbúmina y proteína en la orina 26 V Determinación de sodio y potasio en la orina 27 V Preparación de la muestra: Activación del TGF-ß 1 latente 27 V Cuantificación de TGF-ß 1 en suero sanguíneo mediante la técnica de ELISA 27 V.2.5 Preparación de las muestras de frijol y chilacayote 28 V.2.6 Tratamientos 29 V Tratamiento con la preparación acuosa de frijol y jugo de chilacayote en animales diabéticos 29 V Evaluación de la capacidad hipoglicémica y dosis seleccionada 29 V Evaluación de la capacidad antihiperglicémica y dosis ii

9 seleccionada 30 V Tratamiento subcrónico con la preparación acuosa de la harina liofilizada de frijol a ratas Wistar sanas y diabéticas 30 V.2.7 Análisis estadístico 31 VI. RESULTADOS Y DISCUSION 32 VI.1. Monitoreo del daño renal en ratas sanas y diabéticas 32 VI.1.1 Concentración de glucosa sanguínea en ayuno 32 VI.1.2 Nivel del peso corporal en ratas Wistar sanas y diabéticas 34 VI.1.3 Concentración de glucosa en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas 36 VI.1.4 Concentración de microalbúmina en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas 37 VI.1.5 Concentración de proteína en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas 40 VI.1.6 Concentración de sodio y potasio en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas 41 VI.1.7 Concentración de colesterol total en suero sanguíneo en ratas Wistar sanas y diabéticas 44 VI.1.8 Concentración de colesterol HDL (lipoproteína de alta densidad) en suero sanguíneo en ratas Wistar sanas y diabéticas 46 VI.1.9 Concentración de TGF-ß 1 en suero sanguíneo en ratas Wistar sanas y diabéticas cuantificado mediante la técnica de ELISA 47 VI.1.10 Estudios histopatológicos de los riñones de ratas Wistar sanas y diabéticas 50 VI.2. Tratamiento con frijol sobre la glicemia y el daño iii

10 renal en ratas Wistar diabéticas 51 VI.2.1 Capacidad hipoglicémica del chilacayote y del frijol en ratas Wistar diabéticas 52 VI Capacidad hipoglicémica y antihiperglicémica del chilacayote (Cucurbita ficifolia) en ratas Wistar diabéticas 52 V Capacidad hipoglicémica y antihiperglicémica del frijol (P. vulgaris) en ratas Wistar diabéticas 56 VI.2.2 Tratamiento subcrónico con harina de frijol liofilizado en ratas Wistar sanas y diabéticas 61 V Efecto del frijol sobre la glucosuria en ratas Wistar sanas y diabéticas 63 V Efecto del frijol sobre el consumo de agua en ratas Wistar sanas y diabéticas 64 V Efecto del frijol sobre el consumo de alimento en ratas Wistar sanas y diabéticas 65 V Efecto del frijol sobre el nivel de colesterol total, colesterol HDL, LDL y triglicéridos en ratas Wistar sanas y diabéticas 67 V Efecto del frijol sobre el nivel de albúmina urinaria en ratas Wistar sanas y diabéticas 69 V Efecto del frijol sobre los niveles de sodio y potasio urinario en ratas Wistar sanas y diabéticas 70 V Efecto del frijol sobre los niveles de iv

11 TGF-ß 1 en suero sanguíneo en ratas Wistar sanas y diabéticas 72 V Efecto del frijol sobre los estudios histopatológicos de los riñones en ratas Wistar sanas y diabéticas 73 VII. DISCUSION GENERAL 76 VIII. CONCLUSIONES 82 IX. BIBLIOGRAFIA 83 v

12 ÍNDICE DE FIGURAS Figura Página 1 Estructura y fisiología de la nefrona 7 2 Posibles mecanismos de daño inducidos por la hiperglicemia, debido a la sobreproducción de iones superóxido por la mitocondria 10 3 Mecanismo de activación de la proteína cinasa C 11 4 Vía de la hexosamina inducida por la hiperglicemia persistente 12 5 Mecanismo por el cual la producción intracelular de los precursores de AGEs dañan a las células vasculares 13 6 Vía de señalización del factor de crecimiento TGF-ß 16 7 Perfil de mecanismos patológicos celulares de respuesta específica mediado por TGF-ß en la pérdida funcional progresiva de la nefrona 17 8 (A) Phaseolus vulgaris variedad Pinto Zapata (B) Cucurbita ficifolia Bouché, conocida en México como chilacayote 20 9 Monitoreo de los niveles de glucosa sanguínea en ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Ganancia de peso de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Monitoreo de los niveles de glucosa en la orina de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Concentración de albúmina en la orina (microalbuminuria) de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Monitoreo de los niveles de proteína en la orina en ratas vi

13 sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Monitoreo de los niveles de sodio y potasio en la orina en ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Concentración de colesterol total en suero sanguíneo de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Monitoreo de los niveles de colesterol HDL en suero sanguíneo de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Monitoreo de los niveles de TGF-β 1 en suero sanguíneo de ratas sanas y diabéticas durante un período experimental de 108 días Histopatología de los riñones de los (A) animales sanos y (B) diabéticos, monitoreados durante un período experimental de 108 días Niveles de glucosa en ayuno de ratas Wistar tratadas tratadas con diferentes dosis del jugo liofilizado de chilacayote inmaduro Cucurbita ficifolia. Dosis 250 (A), 500 (B), 1000 (C) y 2000 mg/kg (D) Niveles de glucosa en ayuno de ratas Wistar tratadas con el jugo fresco de chilacayote inmaduro Cucurbita ficifolia (4 ml/kg) en ratas Wistar diabéticas Curva de tolerancia a la glucosa en ratas Wistar diabéticas tratadas con el jugo fresco de chilacayote inmaduro Cucurbita ficifolia (4 ml/kg) Niveles de glucosa en ayuno de ratas Wistar diabéticas tratadas con diferentes dosis del jugo liofilizado de chilacayote maduro (Cucurbita ficifolia). Dosis 250 (A) y 500 mg/kg (B) 56 vii

14 23 Efecto hipoglucemiante de diferentes dosis (100, 300 y 500 mg/kg) de la preparación acuosa del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) en ratas Wistar diabéticas Efecto antihiperglicémico de diferentes dosis (100, 300 y 500 mg/kg) de la preparación acuosa del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) en ratas Wistar diabéticas Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre la concentración de glucosa en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre los niveles de glucosa en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre el consumo de agua en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre el consumo de alimento promedio en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre los niveles de triglicéridos, colesterol total, colesterol HDL, LDL y VLDL en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre los niveles de albúmina en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico 70 viii

15 31 Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre los niveles de sodio y potasio en la orina en ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Efecto del frijol Pinto Zapata (Phaseolus vulgaris) incorporado en la dieta (300 mg/kg) sobre los niveles de TGF-ß 1 en suero sanguíneo de ratas Wistar sanas y diabéticas durante el experimento subcrónico Histopatología de los riñones de los (A) animales sanos control, (B) sanos tratados con frijol, (C) diabéticos control y (D) diabéticos tratados con frijol (300 mg/kg) durante el experimento subcrónico. Tinción hematoxilinaeosina. Gl, glomérulo; V, vaso sanguíneo (400X) 74 ix

16 I. INTRODUCCIÓN La diabetes representa uno de los principales problemas de salud pública en México, incrementándose dramáticamente en los últimos años. Actualmente, la diabetes es la segunda causa de muerte debido a un mal control metabólico y a las complicaciones que presenta la enfermedad con el paso del tiempo. Nuestro país se ubica entre los de mayor número de casos registrados en el ámbito mundial. De acuerdo con la Organización Mundial de la Salud, en 1995 México ocupaba el noveno lugar a nivel mundial con 3.8 millones de personas adultas con diabetes. La perspectiva futura señala que para el 2025 ocupará el séptimo lugar con 11.7 millones de personas afectadas por esta enfermedad. En la actualidad, la diabetes tipo 2 es de especial interés, ya que es la forma más común, con una prevalencia mayor del 90% de todos los casos reportados, presentándose normalmente en la edad adulta y asociada fuertemente con problemas de obesidad y la falta de actividad física. El comienzo de la enfermedad suele ser confuso y el tiempo que transcurre entre el inicio real y el diagnóstico puede ser muy retardado, incluso de varios años. La falta de tratamiento de la enfermedad conlleva a la aparición de una de las complicaciones más comunes en los diabéticos, la nefropatía diabética. La nefropatía diabética (ND) es una de las principales causas de mortalidad por diabetes en muchos países, incluso el estudio para el Control de la Diabetes y sus Complicaciones (DCCT por sus siglas en inglés) demostró que un control estricto de los niveles de glucosa en sangre, resulta significativamente efectivo para reducir el desarrollo de las complicaciones clínicas. Sin embargo, este control de los niveles de glucosa podría no ser suficiente para prevenir tales complicaciones, ya que numerosos estudios han demostrado que el estrés oxidativo, mediado principalmente por la generación de radicales libres inducido por la hiperglicemia, contribuye al desarrollo y progresión tanto de la diabetes como de las complicaciones tardías. Los radicales libres activan a factores de transcripción, los cuales regulan la expresión de un gran número de genes, incluyendo factores de crecimiento como el factor de crecimiento transformante ß 1 (TGF-ß 1 ), el cual está 1

17 estrechamente relacionado con la nefropatía diabética. Por lo tanto, es evidente que son necesarias estrategias de tratamiento alternativas para aminorar el estrés oxidativo. En la medicina herbolaria existe un número importante de plantas que son usadas para controlar los niveles de glucosa sanguínea en los pacientes diabéticos, pero poco se sabe acerca de sus efectos sobre las complicaciones secundarias de la enfermedad. Se ha demostrado que algunos agentes antioxidantes, tales como las vitaminas C y E, disminuyen los síntomas de la nefropatía diabética producida en animales inducidos con el diabetógeno estreptozotocina, evitando la alteración glomerular, disminuyendo la albuminuria y los niveles de TGF-ß 1 de los glomérulos. En la actualidad existe muy poca información con respecto al efecto que pudiera tener el consumo de algún preparado de planta o de alimento en los niveles de TGF-ß 1. Por mencionar un ejemplo, una planta de origen chino llamada Hongbeiyegen (raíz de Alchornea trewioides (Benth.)) reduce los niveles de esta proteína en suero de ratas. Por esta razón, resulta importante realizar estudios con aquellos alimentos en los que se ha reportado capacidad hipoglucemiante y/o antioxidante. Tal es el caso del chilacayote y del frijol, los cuales son alimentos mexicanos ampliamente recomendados para el control de la diabetes. 2

18 II. ANTECEDENTES 2.1 Diabetes mellitus Definición La diabetes mellitus (DM) es un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por hiperglicemia, es decir por un incremento persistente en los niveles basales de glucosa en la sangre (>126 mg/dl ó 7.0 mmol/l), como consecuencia de defectos en la secreción o producción de insulina, en la acción de la insulina, o en ambos (The Expert Committee, 2003). Además, la diabetes es considerada como una enfermedad crónica y degenerativa que presenta alteraciones en el metabolismo de los carbohidratos, los lípidos y las proteínas Prevalencia La prevalencia de diabetes continúa en ascenso en todo el mundo. En 1985 se estimó que existían 30 millones de personas con diabetes y para 1995 esta cifra creció a 135 millones. Los diez países con más casos en el mundo para esas fechas fueron, por orden de frecuencia, India, China, EUA, Rusia, Japón, Brasil, Indonesia, Pakistán, México y Ucrania, de continuar con esta tendencia México en el año 2025 ascenderá al séptimo lugar (King y col., 1998) Clasificación de diabetes mellitus Diabetes tipo 1 Esta forma de diabetes, antes llamada diabetes insulino-dependiente (DMID), diabetes tipo I, o diabetes juvenil, es el resultado de la destrucción autoinmune de las células ß pancreáticas, presentándose una deficiencia absoluta de insulina. La destrucción autoinmune de las células ß tiene múltiples predisposiciones genéticas. La diabetes autoinmune comúnmente ocurre en la 3

19 niñez y la adolescencia, pero puede ocurrir en cualquier edad, aún en las octavas y novenas décadas de vida. Algunos pacientes, particularmente niños y adolescentes, pueden presentar cetoacidosis como primera manifestación de la enfermedad. Otros presentan hiperglicemia moderada en ayuno que rápidamente puede cambiar a hiperglicemia severa y/o cetoacidosis en presencia de infección o estrés (The Expert Committe, 2003) Diabetes tipo 2 Esta forma de diabetes, antes llamada diabetes no insulino-dependiente (DMNID), diabetes tipo II, o diabetes del adulto. Es un término usado para los individuos quienes presentan resistencia a la insulina y, por lo general, deficiencia de insulina. La etiología de la diabetes tipo 2 es compleja y multifactorial, donde la destrucción autoinmune de las células ß no ocurre (The Expert Committee, 2003). Es más común que el tipo 1, representa aproximadamente al 90% de todos los casos de diabetes y generalmente se presenta en la edad adulta. Factores de riesgo asociados con la diabetes tipo 2 Aún cuando la característica principal sea la hiperglicemia, se han descrito factores, tanto ambientales como genéticos, para su desarrollo. Entre los factores ambientales de riesgo tenemos la edad, el tipo de alimentación y el estilo de vida. Se presenta normalmente en la edad adulta, en tanto que el 80% de los adultos que presentan la enfermedad son clasificados como obesos o con sobrepeso y la obesidad por sí misma causa cierto grado de resistencia a la insulina (Brownlee, 2001). Los pacientes que no son obesos pueden tener un porcentaje incrementado de grasa corporal distribuída predominantemente en la región abdominal (The Expert Committe, 2003). La influencia de estos factores en el desarrollo de la enfermedad se ha demostrado claramente, ya que cambios en el estilo de vida retrasan, e incluso previenen, la aparición de la mayoría de las complicaciones asociadas con la diabetes. Por su alta incidencia entre algunos grupos étnicos, su elevada frecuencia en familias y su alta correlación de incidencia en gemelos 4

20 monocigóticos, se han buscado y encontrado genes relacionados con la susceptibilidad a la diabetes tipo 2 (Demenais y col., 2003). En este tipo de diabetes, los niveles elevados de glucosa en sangre son causados, en gran medida, por la incapacidad de ciertos tejidos (como el adiposo y el muscular) para responder a la insulina (estados de hiperinsulinemia y resistencia a la acción de la insulina). Además de la hiperglicemia, la enfermedad se acompaña frecuentemente con hipertrigliceridemia, hipercolesterolemia, elevación de los niveles de colesterol de baja densidad (LDL) y disminución de los de alta densidad (HDL). Esta condición de resistencia a la insulina, dislipidemia e hipertensión se denomina síndrome metabólico o síndrome X (Brownlee, 2001) Cuadro clínico de la diabetes La mayoría de las veces la diabetes puede ser una enfermedad asintomática; sin embargo, cuando la hiperglicemia se deja evolucionar a niveles >250mg/dl, algunos síntomas pueden aparecer. Una vez manifestada la sintomatología clásica del padecimiento, el diagnóstico es relativamente simple en más del 90% de los casos. Sin embargo, para establecer el diagnóstico de diabetes mellitus en su fase clínica, es indispensable demostrar hiperglicemia en ayunas, o bien postprandial, así como glucosa en la orina. Los síntomas más importantes del padecimiento son: poliuria (formación excesiva de orina), polidipsia (sed excesiva y la consecuente ingestión abundante de líquidos), polifagia (ingestión excesiva de alimentos), pérdida de peso, visión borrosa, deterioro en el crecimiento, susceptibilidad a ciertas infecciones y alteración de la cicatrización de heridas, entre otros (Figuerola, 1999) Complicaciones de la diabetes tipo 2 Los niveles elevados de glucosa que caracterizan a la diabetes, eventualmente generan una serie de complicaciones que, de no ser atendidas, provocan la muerte. La hiperglicemia persistente se ha asociado con los siguientes daños patológicos: 5

21 I. Micro-vasculares, presente en la retina, en los glomérulos y en los nervios periféricos (retinopatía, nefropatía y neuropatía periférica, respectivamente). II. Macro-vasculares, asociados con daños arteroscleróticos, al afectar la irrigación en distintos tejidos y órganos provocando infarto al miocardio, apoplejía o amputación de alguna extremidad en el paciente (The Diabetes Control, Trial Group, 1993; Wei, y col., 1998; Ginsberg, 2000). El daño renal (nefropatía diabética) es una de las complicaciones crónicas más graves y más frecuentemente observada en los pacientes con diabetes tipo 2, dicha alteración es la principal causante de mortalidad por diabetes. De ahí la importancia de que tiene el poder predecir y controlar de forma temprana el daño renal. Para entender el problema, resulta entonces relevante conocer la constitución y funcionalidad del órgano afectado. 2.2 Anatomía y fisiología del riñón Cada riñón tiene en su corteza alrededor de un millón de minúsculas unidades llamadas nefronas. La nefrona a su vez está formada por una pequeña bolsa llamada cápsula de Bowman, donde en su interior se agrupa una red de capilares sanguíneos, que en su conjunto se denomina glomérulo, el cual es responsable de la producción de la orina a partir de la elaboración del ultrafiltrado plasmático. A lo largo de su recorrido por la nefrona, sistemas enzimáticos complejos se encargan de recapturar sodio, agua, cloro, glucosa y aminoácidos, en tanto que otros favorecen la secreción a la luz tubular de ácidos orgánicos, potasio y urea, hasta formar la orina (Figura 1). La composición final de las proteínas de la orina, tanto en sujetos sanos como en enfermos, es el resultado de tres funciones: filtración glomerular, reabsorción tubular y la adición o secreción de proteínas a la orina a través del tracto genitourinario. La perturbación de estos mecanismos conduce a la presencia de proteinuria. 6

22 La aparición anormal de algunas sustancias en la orina es un índice de daño en la estructura de la nefrona. La proteinuria, aunque puede tener origen en lesión tubular, casi siempre identifica daño del glomérulo, que es el sitio encargado de detener su tránsito hacia el ultrafiltrado (Tortora y col., 1993). Figura 1. Estructura y fisiología de la nefrona (Tortora y col., 1993). 2.3 Nefropatía diabética La nefropatía diabética es una complicación que afecta severamente a los pacientes que presentan glicemia crónica mal controlada. Esta alteración es generada por una serie de cambios estructurales y funcionales que ocurren en el riñón del paciente diabético, manifestándose, inicialmente, por la presencia persistente de proteínas en la orina (proteinuria mayor a 0.5 g/24 h). Se caracteriza por una progresión en el deterioro de la función renal, que lleva al 7

23 paciente a diálisis renal o incluso al transplante (Tabaei y col., 2001). La glomeruloesclerosis y fibrosis túbulointersticial son marcadores de nefropatía diabética avanzada con insuficiencia renal (Ziyadeh, 1993). La mortalidad en pacientes diabéticos con nefropatía es de veces mayor que en pacientes sin nefropatía. Se desarrolla en aproximadamente 40% de los pacientes con diabetes tipo 2, particularmente cuando se presenta descontrol metabólico crónico, además de historia familiar de nefropatía diabética o de hipertensión arterial (Aguilar y col., 2000) Pruebas de diagnóstico para la nefropatía diabética El primer cambio detectable en el curso de una nefropatía diabética es un engrosamiento en el glomérulo. En esta etapa, el riñón puede comenzar a permitir más albúmina (proteína) de lo normal en la orina y esto se puede detectar por medio de pruebas sensibles para la microalbúmina, definida como la presencia en la orina de microgramos por minuto ó miligramos de albúmina por 24 horas. A medida que la nefropatía diabética progresa, se destruye un creciente número de glomérulos. Ahora las cantidades de albúmina que están siendo excretadas se incrementan y se pueden detectar por medio de técnicas comunes de análisis de orina (Mogensen, 2003). Este análisis de orina también puede mostrar glucosa en la orina, especialmente si la glucosa en la sangre está inadecuadamente controlada y puede haber otros signos de complicaciones diabéticas. Las personas con diabetes tipo 1 y tipo 2 están en riesgo y es mayor si los niveles de glucosa en sangre no están bien controlados, ya que entre el 20 y el 40% de los pacientes con microalbuminuria progresan a macroproteinuria, de los cuales, un 20% avanzará a insuficiencia renal crónica terminal (IRCT) (Asociación Americana de Diabetes, 2003), por eso resulta importante que tengan un control estricto de los niveles de glucosa en la sangre, la presión sanguínea, el colesterol y el peso Patogénesis de la nefropatía diabética 8

24 Estudios clínicos han demostrado que existe una relación fuerte entre la hiperglicemia y las complicaciones micro y macro-vasculares de la diabetes tanto en el tipo 1 como en el tipo 2. La mayor parte de estos efectos patológicos se explican mediante cuatro hipótesis, como consecuencia a los niveles elevados de glucosa persistentes. Es entonces cuando la sobreutilización de la glucosa origina la elevación de intermediarios metabólicos de la glucólisis ocasionando: 1) incremento en el flujo de metabolitos (glucosa) a través de la vía de los azúcares polihidroxilados (polioles), 2) incremento en el flujo de metabolitos (fructosa-6-fosfato) a través de la vía de la hexosamina, 3) activación de la proteína cinasa C (PKC) y el 4) incremento intracelular de proteínas glicosiladas y de productos finales de glicosilación avanzada (AGEs) a través de la glicosilación no enzimática (Figura 2) (Brownlee, 2001). Estos cuatro mecanismos patogénicos inducidos por la hiperglicemia, aunque diferentes entre si, son el resultado de la alteración en los niveles de superóxidos (O 2 -) producidos por la cadena de transporte de electrones mitocondrial (Du y col., 2000; Nishikawa y col., 2000). El superóxido promueve el daño de macromoléculas celulares, sin embargo es el ataque al DNA lo que activa a la enzima poli-(adpribosa)-polimerasa (PARP), misma que inhibe a la enzima gliceraldehído fosfato deshidrogenasa (GAPDH), ocasionando la acumulación de los metabolitos de la glucólisis (Du y col., 2003). Sin embargo, sólo tres de los cuatro mecanismos de daño propuestos, el incremento intracelular de AGEs, la activación de PKC y el incremento en el flujo de metabolitos a través de la vía de la hexosamina influyen en la génesis de la nefropatía diabética. 9

25 Glucosa NADPH NADP + NAD + NADH Sorbitol Vía de los polioles Fructosa Fructosa-6-P GFAT Gln Glu Glucosamina-6-P Vía de la hexosamina UDP-GlcNAc Gliceraldehído-3-P NADH NAD + DHAP α-glicerol-p DAG PKC Vía de la proteína cinasa C NAD + NADH GAPDH O 2 - Metilglioxal Vía AGE AGEs 1,3-difosfoglicerato Figura 2. Posibles mecanismos de daño inducidos por la hiperglicemia, debido a la producción elevada de iones superóxido por la mitocondria (Brownlee, 2001). Activación de PKC La proteína cinasa C (PKC) es activada por receptores acoplados a proteínas G (GPCR) y cinasas de tirosina (TyrK), los cuales son usados por muchas citocinas y factores de crecimiento relacionados con la nefropatía diabética. La unión de esos ligandos a su receptor activan a la fosfolipasa C (PLC), la cual libera diacilglicerol (DAG) e inositol trifosfato (IP 3 ) desde el fosfatidilinositol 4,5-bifosfato (PIP 2 ). IP 3 permite entonces el incremento de iones de calcio intracelular, DAG y calcio activan a la PKC citosólica translocándola a la membrana celular (Figura 3) (Lea-Yea y col., 2001). Sin embargo, la hiperglicemia puede también activar a PKC por la síntesis de novo de DAG. Durante la glicólisis, la glucosa es fosforilada y convertida hasta la forma gliceraldehído-3-fosfato, el cual es transformado a dihidroxiacetona fosfato (DHAP) y posteriormente a glicerol-3-fosfato. Éste último es transformado en ácido fosfatídico y diacilglicerol (DAG). Los niveles 10

26 elevados de DAG incrementan la afinidad de PKC por el calcio y fosfatidilserina, permitiendo así la activación prolongada de PKC (Rossert y col., 2000). La activación de PKC por la hiperglicemia se ha relacionado con la activación de NF- B en células endoteliales (Brownlee, 2001). Figura 3. Mecanismo de activación de la proteína cinasa C a través de receptores acoplados a proteínas G (Lea-Yea y col., 2001). Vía de la hexosamina En este mecanismo, el intermediario glicolítico fructosa-6-fosfato es convertido por la enzima glutamina:fructosa-6-fosfato amidotransferasa (GFAT) en glucosamina-6-fosfato. Este compuesto nuevamente es convertido a UDPGlcNAc (UDP-N-acetilglucosamina). La enzima O-GlcNAc transferasa (OGT) cataliza la unión de N-acetilglucosamina (GlcNAc) a residuos de serina y treonina de factores de transcripción, tales como Sp1, originando finalmente un incremento de la producción de factores como PAI-1 (inhibidor fibrinolítico) y TGF-ß 1, éste último involucrado en el desarrollo de la nefropatía (Figura 4) (Brownlee, 2001). 11

27 Figura 4. Vía de la hexosamina inducida por la hiperglicemia persistente (Brownlee, 2001). Formación de productos finales de glicosilación avanzada (AGEs) La formación de AGE es elevada en presencia de hiperglicemia y estrés oxidativo. Los AGEs son generados intracelularmente desde los precursores dicarbonilos derivados de la glucosa y pueden elevarse desde la autooxidación de la glucosa a glioxal, descomposición del producto de Amadori a 3- deoxiglucosona y de la fragmentación de gliceraldehído-3-fosfato y dihidroxiacetona fosfato a metilglioxal. Tanto glioxal, metilglioxal y 3- deoxiglucosona reaccionan con grupos amino de proteínas intra y extracelular para formar AGEs, los cuales son encontrados en cantidades elevadas en el glomérulo renal. La producción intracelular de los precursores AGE puede dañar a las células a través del siguiente mecanismo: Las proteínas (como la hemoglobina) del plasma modificados por los precursores AGE se unen a los receptores AGE (RAGE) en células endoteliales, células mesangiales glomerulares y 12

28 macrófagos, induciendo la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS). Los ROS a su vez activan al factor de transcripción NF-κB, causando cambios patológicos en la expresión de genes (Figura 5), principalmente de algunas citocinas, los cuales son mediadores importantes de inflamación (Brownlee, 2001). Figura 5. Mecanismo por el cual la producción intracelular de los precursores de AGEs dañan a las células vasculares (Brownlee, 2001). Activación de NF- B Uno de los blancos intracelulares de la hiperglicemia y del estrés oxidativo es la activación del factor de transcripción NF- B. NF- B juega un papel crítico en la respuesta inmune e inflamatoria y en la apoptosis. En las células, NF- B está presente en el citoplasma como un heterodímero inactivo, consistiendo de las subunidades p50 y p65 formando un complejo con una subunidad de proteína inhibitoria, I B. Después de la estimulación, una 13

29 cascada de cinasas de serina lo activa ocasionando la fosforilación de I B. Este evento prepara a I B como un sustrato para la ubiquitinación y su degradación subsecuente, liberando el heterodímero de NF- B para translocarse al núcleo (Evans y col., 2002). NF- B regula la expresión de un gran número de genes, incluyendo factores de crecimiento como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y del factor de crecimiento transformante ß (TGF-ß) en macrófagos y células mesangiales, y la expresión de citocinas pro-inflamatorias en células endoteliales, receptores para los productos finales de glicosilación avanzada (RAGE), moléculas de adhesión como la molécula de adherencia de células vasculares (VCAM) entre otros (Brownlee, 2001). Muchos de estos productos de los genes regulados por NF- B a su vez, vuelven a activar a NF- B (Evans y col., 2001). Aunque la expresión de algunas de esas moléculas, como las citocinas proinflamatorias y factores de crecimiento, y la peroxidación de lípidos parecen ser la causa de la acumulación de la matriz extracelular en la progresión del daño renal, es el TGF-ß la molécula profibrótica más ligada en el desarrollo de la fibrosis renal durante el desarrollo de la nefropatía diabética. 2.4 El factor de crecimiento transformante beta (TGF-ß) y su función biológica TGF-ß pertenece a un grupo de citocinas llamado la superfamilia del TGF-ß, los cuales regulan una gran variedad de procesos biológicos fundamentales como son el crecimiento celular epitelial, la diferenciación, desarrollo, motilidad, organización, apoptosis y tumorogénesis. TGF-ß es una proteína extracelular producida, principalmente, por un sub-grupo de linfocitos T, pero se considera que es producido por otras células en cantidad considerable como son las plaquetas, los macrófagos, los neutrófilos, células de la médula ósea y algunos tejidos como la placenta, el endometrio de los riñones, y algunas células cancerosas. El TGF-ß humano consiste de tres isoformas, TGF-ß 1, TGF-ß 2 y TGF-ß 3, todos codificados por un único gen. Cada isoforma es sintetizada como parte de un precursor más largo. 14

30 La forma activa del TGF-ß es un homodímero de 25 kda. Las células lo secretan como una forma inactiva, incapaz de unirse a su receptor, ya que se encuentra unido no covalentemente a una proteína denominada proteína latente asociada (LAP). Este complejo inactivo, a su vez forma un complejo cuando se asocia covalentemente con la proteína denominada proteína de unión al TGF-ß latente (LTBP), la cual es un componente de la matriz extracelular necesaria para la secreción y el almacenamiento del TGF-ß. Por lo tanto, la activación del complejo inactivo se da primero por su unión a la matriz extracelular y posteriormente se libera el TGF-ß activo por acción proteolítica, el cual ya es capaz de unirse a su receptor. Prácticamente todas las células en el cuerpo humano expresan receptores para TGF-ß, de los cuales se han identificado varias clases y con diferentes afinidades, siendo los mas importantes los receptores al TGF-ß del tipo I y II. Los receptores tienen actividad intrínseca de cinasa en residuos de serina y treonina, por lo tanto, inducen distintas cascadas de transducción de señales (Chin y col., 2003) Mecanismo de señalización de TGF-ß a través de las proteínas Smads El mecanismo de transducción implica la participación de un grupo de proteínas conocidas como Smads que al ser activadas por fosforilación se translocan al núcleo donde actúan como factores de transcripción. Después de la unión del TGF-ß, Tß-RII recluta y fosforila a Tß-RI, dirigiendo así la activación de Smad2 y Smad3 mediante fosforilación (este proceso puede ser inhibido por Smad7). Una vez activados, Smad2 y Smad3 forman heterodímeros con Smad4 translocándose al núcleo. El complejo Smad, junto con co-activadores, co-represores y otros factores de transcripción, regula la expresión de genes (Chin y col., 2003, Figura 6). Las respuestas celulares inducidas por TGF-ß varían entre los tipos de células, debido a que la mayoría de las células de los mamíferos contienen receptores a TGF-ß en sus superficies y además un grupo de factores de transcripción diferentes que se puedan unir a los Smads activados. Por ejemplo, en células epiteliales y en fibroblastos, TGF-ß induce la expresión no sólo de proteínas de la matriz 15

31 extracelular (por ejemplo, colágeno), sino también de proteínas que inhiben proteasas del suero, los cuales de otra manera degradarían la matriz. También se induce la expresión de proteínas como p15, los cuales detienen el ciclo celular en estado G 1, bloqueando tanto la proliferación celular como la transcripción del gen inhibidor activador plasminógeno (PAI-1) y la represión del gen Myc, el cual reduce la expresión de genes promotores de crecimiento (Lodish y col., 2004). Figura 6. Vía de señalización del factor de crecimiento TGF-ß (Hong-Jian y col., 2001; Schnaper y col., 2002) TGF-ß y su relación con la nefropatía diabética Varios estudios demuestran que el mecanismo Smad está presente y funciona en las células mesangiales glomerulares y éste puede mediar la expresión de colágeno I estimulado por TGF-ß 1. Datos derivados de estudios in vivo e in vitro sugieren que el TGF-ß juega un papel importante en la acumulación de la matriz extracelular (colágeno, fibronectina y proteoglicanos) en el mesangio glomerular y túbulos 16

32 intersticial observada durante el curso de la nefropatía diabética. También, se ha demostrado que TGF-ß puede inducir apoptosis de células endoteliales, epiteliales y podocitos del riñón. En última instancia, todos estos factores resultan en patologías como la fibrosis tubulointersticial y la glomeruloesclerosis, que finalmente ocasionan la pérdida del funcionamiento de la nefrona (Figura 7) (Böttinger y col., 2002). Es por eso que el daño inicial de la nefropatía diabética causado por la diabetes tipo 2 se ha asociado con la activación o el incremento de la proteína TGF-ß 1 y de NF- B (Fernández y col., 2003; Spranger y col., 2003; Hanley y col., 2004). Por lo tanto, diferentes estudios sugieren que una inflamación moderada y persistente precede a los síntomas iniciales de la diabetes tipo 2 (Lehrke y col., 2004). TGF-ß Apoptosis de células epiteliales Apoptosis de células endoteliales Apoptosis de podocitos Degeneración tubular Activación de fibroblasto Activación célula mesangial Disminución de podocitos Supervivencia endotelial baja Supervivencia endotelial baja Atrofia tubular Pérdida de capilaridad peritubular Aumento de matriz intersticial Aumento de matriz mesangial Pérdida de capilaridad glomerular Adhesión glomerular Fibrosis tubulointersticial Glomeruloesclerosis Pérdida de la Nefrona Figura 7. Perfil de mecanismos patológicos celulares de respuesta específica mediado por TGF-ß en la pérdida funcional progresiva de la nefrona (Böttinger y col., 2002). 17

33 Estudios realizados con distintos grados de insuficiencia renal crónica (IRC) sugieren que los enfermos que presentan daño renal están en una situación mayor de estrés oxidativo en comparación con los sanos, y que el grado de estrés oxidativo está correlacionado con el grado de IRC. Aunado a esto, también existen trabajos en los que se ha observado una superinducción de enzimas antioxidantes en condiciones de estrés oxidativo, lo que demuestra claramente que el aumento de la actividad antioxidante es la consecuencia del exceso de oxidación, en un intento de restaurar parcialmente la homeostasis celular. Por lo tanto, el uso de antioxidantes, encontrados en algunas plantas y frutos con dichas propiedades y con efecto hipoglucemiante, podrían mejorar la condición patológica de la nefropatía diabética. 2.5 Plantas antidiabéticas empleadas en la medicina tradicional mexicana Por muchos años, las personas en México han usado plantas de manera empírica para el tratamiento de la diabetes. La información etnobotánica mundial sobre plantas medicinales reporta casi 800 plantas usadas en el control de la diabetes mellitus. Aproximadamente 150 de estas plantas existen en México (Alarcón y col., 1998). En muchos países ha habido un incremento en el número de investigaciones clínicas y experimentales dirigidas hacia la validación de las propiedades antidiabéticas, las cuales son atribuidas empíricamente a esos remedios. El efecto hipoglucémico de varias plantas, usadas como remedios antidiabéticos, se ha confirmado, en tanto que el mecanismo de la actividad hipoglucémica de esas plantas están siendo estudiados (Roman y col., 1995) Phaseolus vulgaris y la diabetes Experimentos realizados con conejos diabéticos, inducidos con aloxano, mostraron que la administración de una combinación de un extracto de frijol común (Phaseolus vulgaris) y clorpropamida reduce los niveles de glucosa en sangre. Aunque un efecto similar se observó con la administración de clorpropamida, la combinación de tratamientos produjo un efecto hipoglucémico más prolongado (Khaleeva y col., 1987). En otro estudio realizado con conejos, 18

34 la administración de una preparación acuosa de Phaseolus vulgaris disminuyó el área bajo la curva de tolerancia a la glucosa y el efecto fue incluso mayor que la tolbutamida (Roman y col., 1991). Adicionalmente, estudios realizados con ratas diabéticas inducidas con estreptozotocina demostraron que la administración diaria por vía oral de 200 mg/kg del extracto acuoso de las vainas de Phaseolus vulgaris (una variedad encontrada en la India) reduce significativamente, no sólo los niveles elevados de glucosa en sangre, sino también de triglicéridos en suero, ácidos grasos libres, fosfolípidos, colesterol total, lipoproteína de muy baja densidad (VLDL), LDL (Venkateswaran y col., 2002) y hemoglobina glicosilada, además de incrementar la hemoglobina total e insulina en plasma en animales diabéticos, resultando más eficaz que el fármaco (sulfonilurea) (Pari y col., 2003). En otro estudio realizado por Petlevski y colaboradores (2001), se analizó el efecto de dos extractos etanólicos de Phaseolus vulgaris, uno concentrado a 45 ºC y otro sin evaporar, sobre una curva de tolerancia a la glucosa en ratones no obesos diabéticos inducidos con aloxano. Los resultados mostraron una disminución de los niveles de glucosa en sangre en un 10 y 20%, respectivamente, para ambos extractos (Petlevski y col., 2001). Las propiedades benéficas de los extractos de frijol se han relacionado con la presencia de los microconstituyentes bioactivos y las características fisicoquímicas del almidón resistente, inhibidores de proteasas, saponinas, fitatos y compuestos fenólicos (Serrano, 2004). Un gran número de los componentes ya se han identificado en diferentes variedades de frijol, como los compuestos fenólicos tales como ácido gálico, catequina, acido siríngico, ácido cafeíco, clorogénico y vainillina (Guzmán y col., 1998), y se ha sugerido que estas propiedades benéficas se deben a que dichos compuestos intervienen como antioxidantes naturales de los alimentos (Tsimidou, 1998) Cucurbita ficifolia Bouché y la diabetes Cucurbita ficifolia Bouché (Cucurbitaceae) es conocida en México como chilacayote (Figura 8B). Las frutas de C. ficifolia se han usado como remedios, su uso medicinal actual en México es para el tratamiento de la 19

35 diabetes tipo 2. En este caso, los curanderos locales recomiendan la ingestión de un macerado en agua de la fruta fresca (Alarcón y col., 2002). Con respecto a las investigaciones realizadas en torno a C. ficifolia se tienen reportes de la actividad hipoglucémica aguda en conejos temporalmente hiperglicémicos, en conejos diabéticos inducidos con aloxano y, recientemente, en pacientes diabéticos tipo 2 (Acosta y col., 2001). Un estudio realizado por Alarcón y colaboradores (2002) reveló que el liofilizado del jugo de las frutas de Cucurbita ficifolia Bouché administrado vía intraperitoneal, en una manera dosis dependiente, produjo una disminución significativa de la glucemia en ratones sanos. Este mismo comportamiento se observó cuando la administración fue por vía oral, sin embargo, el efecto fue menor. De igual manera, cuando el jugo fue administrado por vía intraperitoneal mostró un efecto hipoglucémico en ratones diabéticos inducidos con aloxano, mientras que la administración oral diaria de esta preparación mostró una reducción altamente significativa de la glucemia después de 14 días de tratamiento. Sin embargo, aunado a esto, también observaron un efecto tóxico cuando el jugo fue administrado tanto por vía intraperitoneal como por vía oral (Alarcón y col., 2002). A B Figura 8. (A) Phaseolus vulgaris variedad Pinto Zapata (B) Cucurbita ficifolia Bouché, conocida en México como chilacayote (Guzmán y col., 1998). 20