Rabia. Diagnostico y Perspectivas de Investigación. Rene Edgar Condori Instituto Nacional de Salud

Transcripción

1 Rabia Diagnostico y Perspectivas de Investigación Rene Edgar Condori Instituto Nacional de Salud

2 Que es la rabia? Rabia es una enfermedad zoonotica que puede afectar animales (mamiferos) silvestres, domesticos, y humans.

3 La Rabia Produce encefalomielitis aguda Virus neurotropico,familia: Rhabdoviridae, genero Lyssavirus, Genotipo Rabia. Genoma ARN de polaridad negativa El virus de la rabia presenta 2 estructuras antigénicas nicas principales 1. Interno de naturaleza Nucleoproteíca ca que es especifico 2. Externo de naturaleza glicoproteica responsable de la producción n de anticuerpos.

4 Diagnóstico Las técnicas de detección del virus (diagnostico), son importantes para la determinación de la epidemiología de la enfermedad.

5 Diagnóstico de Rabia humana Diagnóstico Clínico, de acuerdo a las manifestaciones predominantes se ha clasificado en dos formas (furiosa y paralítica). La única forma de sospechar la enfermedad y hacer el diagnóstico es el antecedente de contacto o mordedura, Diagnóstico diferencial: histeria. psicosis, poliomielitis, encefalitis por herpes simple, encefalitis post-vacunal, tétanos, síndrome de Guillen Barré, mielitis transversa, malaria cerebral y epilepsia, etc.

6 Diagnóstico de Rabia Humana La enfermedad se diagnóstica ante-morten por la determinación de anticuerpos neutralizantes en LCR (Serológico), determinación de antígenos virales (virológico) en saliva o biopsia de piel nuca mediante técnicas de biología molecular y técnica de anticuerpos fluorescentes (biopsia) constituyen las técnicas más confiable en las primeras fases de la enfermedad

7 Diagnóstico Virológico post-mortem Finalidad, identificar la presencia viral en tejido nervioso (Medula, Cerebelo, y Cerebro) mediante la detección de antígenos Inmunofluorescencia Directa (1 3 días) Prueba biológica (21 días) Nombre del remitente Lugar y Fecha de recoleccion Especie, (murcielago) Importante

8 Inmunofluorescencia Directa (IFD) Permite detectar de antígenos virales mediante anticuerpos fluorescente Inmunofluorescencia Directa (IFD) Técnica rápida de alta sensibilidad y especificidad,. Experiencia del técnico y calidad del conjugado.

9 Prueba Biologica Permite realizar el aislamiento y confirmación del diagnostico de IFD ( 21 días) Aislamientos positivos son útiles para realizar estudios de caracterización antigénica (AcM) y genética (RT PCR y Secuenciamiento).

10 Caracterización Antigénica Finalidad, identificar los reservorios del virus de la rabia presente en una determinada área geográfica se realiza mediante el empleo de un panel de 8 anticuerpos monoclonales (Center for Disease Control And Prevention CDC - USA)

11 Patrones de reacción de las diferentes variantes antigénicas con los anticuerpos monoclonales C1 C4 C9 C10 C12 C15 C18 19 Ag V CVS Lab. Perro/mangosta Perro Vampiro Tadarida Brasiliensis Vampiro - + V + + V - V 5 Lasiurus cinereus V Zorro de Arizona Zorrilo Centro/ Sur Tad. Bra.. Mex Zorrillo Vampiro Velasco-Villa, 2005 Molecular epizootiology of rabies associated with terrestrial carnivores in Mexico

12 CARACTERIZACION ANTIGENICA Variantes antigénicas 1 Rabia urbana 2 3 Rabia silvestre 5

13 Caracterización Genética Finalidad, determinar la variabilidad genética de los virus según reservorio, se realiza mediante técnicas de biología molecular (RT PCR y secuenciamiento genético ) gen de elección - Nucleoproteína el uso de ensayos moleculares y de la reacción en cadena de la polimerasa no es conveniente en el diagnóstico habitual de la rabia. Comité de expertos OMS Marcador de Peso Molecular Gen Amplificado

14 Análisis filogenético Da Rosa, 2006 Bat-transmitted Human Rabies outbreaks, Brazilian Amazon

15 Serología Solo es útil para determinar la respuesta inmune despues de una vacunación y en la primeras fase de la enfermedad (LCR) El metodo a utilizar es la neutralización viral, determina el titulo de anticuerpos protectores (personal de salud)

16 RED NACIONAL DE LABORATORIOS CAPACITADOS EN DIAGNOSTICO DE RABIA POR IFD LABORATORIO DE REFERENCIA NACIONAL DE ZOONOSIS VIRALES LABORATORIOS REGIONALES QUE REALIZAN DIAGNOSTICO DE RABIA POR INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA (IFD) LABORATORIO CAPACITADO EN EL DIAGNOSTICO DE RABIA EN EL 2005

17 Perspectivas de Investigación en el Peru Rabia es una encefalitis viral aguda y causa aproximadamente 55,000 muertes por año 2007 alrededor del mundo (OMS)

18 Casos de rabia confirmado (INS) 01 Zorro Total Porcino Ovino Murciel ago Mono Human o Felino Equino Chozna Caprino Can Burro Bovino Alpaca

19 Epizootiología de la rabia RESERVORIOS DE LA RABIA EN LAS AMERICAS RABIA URBANA RABIA SILVESTRE Perros Dogs Mapaches Raccoons Coyotes Gray foxes Arctic foxes Vampire bat Big brown bat Silver hair bat Spotted skunk Stripped skunk Mongooses RABIA ASOCIADO A MAMIFEROS TERRESTRES RABIA ASOCIADO A MAMIFEROS TERRESTRES Red bat Free tail bat RABIA ASOCIADO A MURCIELAGOS RABIA ASOCIADO A MURCIELAGOS VECTORS Cats Ferrets Raccoon dogs Beavers and woodchucks Pigs Humans and horses Cows Goats and Sheep SUSCEPTIBLE SPECIES (DEAD ENDS) ENZOOTIC RABIES Fuente Diapositiva A. Velasco Villa CDC -USA

20 Distribucion Global de rabia en mamiferos, reservorio y vector Rupprecht CE, The Lancet Infectious Diseases Vol 2 June 2002

21 Construcción de árboles filogenéticos Como determinar la relación genética de los virus?

22 Ejemplo 1, Carnieli, 2006 Molecular epidemiology of rabies virus strains isolated from wild canids in Northeastern Brazil

23 Ejemplo 2, Paez, 2007, Molecular epidemiology of rabies in Colombia based on partial nucleoprotein gene sequences

24 Rene E. Condori, Omar Caceres

25 ANTIGENIC AND MOLECULAR CHARACTERIZATION OF RABIES VIRUS ISOLATES FROM HIGHLAND REGION ALTIPLANO IN PERU René Condori Condori, Andrés Velasco Villa, Omar Cáceres Rey, Albina Díaz Olivera, Ricardo López Ingunza Laboratorio de Zoonosis Virales, Centro Nacional de Salud Pública, Instituto Nacional de Salud. Capac Yupanqui 1400 Jesús María. Lima, Perú Viral and Rickettsial Zoonoses Branch, Division of Viral and Rickettsial Diseases, Centers for Disease Control and Prevention Clifton Rd., Mail Stop G33, Atlanta, Georgia 30333, USA

26 Rabia en Perú Humanos Bovinos Gatos Otros Canes

27 Rabies in Perú

28 Localizacion de los casos de rabia en el departamento de Puno

29 Rabies in wild and domestic animals in Peruvian Altiplano Year SPECIMEN Dog Cow Pig Human Bat Cat Llama TOTAL TOTAL

30 Determinacion de variantes antigenicas

31 Distribuciòn de casos en el departamento de Puno dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper cowPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper PeruDgAgV dogPnper pigPnper humPnper pigPnper humPnper dogPnper dogPnper dogPnper catPnper dogPnper dogPnper cowPnper LamPnper dogPnper humMDper EBL2 0.1

32 dogPnper humPnper pigPnper pigPnper humPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper PeruDgAgV dogPnper dogPnper cowPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper cowPnper catPnper LamPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper foxPiuper ChsMDper HumCusper NMRCD-peru BurAyaper Vampbtperu humMDper humApuper humApuper goatApuper humApuper humMDper goatPiuper dogPiuper donkeyPiuper Duvenhage2 EBL Rabia urbana Rabia silvestre Rabia en Perú Rabia en Perú

33 pigPnper dogPnper humPnper humPnper dogPnper pigPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper Blv1DgAgV dogPnper dogPnper cowPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper dogPnper PeruDgAgV dogPnper cowPnper catPnper dogPnper LamPnper dogPnper dogPnper Blv9DgAgV1 Blv2DgAgV1 Blv8DgAgV1 Blv4DgAgV1 Blv5DgAgV1 ArgBlvDgAgV foxPiuper USCAsk87 PVRABVgp1NC PV-vacper CVS91vacper CVSvacper CVS51vacper Arg1adgAgV2 AY340784BlvdgAgV2 BrdgAgV2Blvlike humMDper ColdgVG2cons ColdgVG1b 5530Colputhm donkeyPiuper goatPiuper dogPiuper txusdg2361 Brhoarybt TdbrCidmtc ChsMDper 5596Colvalbt02 BrHT-likefromArgChi MxUkbtHtlike BrTdbr2 Brvampbt HumCusper Brvampbt humApuper humMDper humApuper goatApuper humApuper Vampbtperu04 ColDr6 ColDr7 BrvampbtArglike brhm4099 VampbtBlv1 Brvampbt10 VampbtArg Brvampbt9 NMRCD-peru 5462Colquidg BurAyaper Duvenhage2 EBL Casos de rabia asociado a perros Rabia asociado con animales silvestres

34 Secuenciamiento parcial de la nucleoproteina 62 PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN Rabia asociado a perros en el departamento de Puno - region Altiplano Altiplano 67 PERPIU strain SAD B19 95 A 93 B 100 PERPIU PERPIU PERPIU PERMDD C 99 PERAYA PERAPU PERAPU Duvenhage2 EBL2 0.05

35 BolivdogAY BolivdogAY BolivdogAY PERPUN PERPUN BolivdogAY PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN BolivdogAY PeruDgAgV PERPUN PERPUN Blv1DgAgV1 PERPUN PERPUN PERPUN PERPUN Blv9DgAgV1 Blv2DgAgV1 Blv8DgAgV1 Blv4DgAgV Blv5DgAgV1 75 ArgBlvDgAgV1 PERPIU strain SAD B19 Arg1adgAgV2 67 AY340784BlvdgAgV PERMDD BrdgAgV2Blvlike PERPIU PERPIU PERPIU Colputhm PERAPU PERAPU Vampbtperu04 ColDr7 ColDr6 99 brhm4099 VampbtBlv PERAYA NMRCD-peru 5462Colquidg Brvampbt10 Brvampbt VampbtArg BrvampbtArglike Duvenhage2 EBL2 Secuenciamiento parcial de la nucleoproteina Virus de la rabia asociado a perros Puno y Bolivia Rabia asociado a perros Madre de Dios (Perú) Rabia asociado a perros n Piura (Perú) Rabia asociado a murcielagos Perú 0.05

36 Rabia transmitida por perros INS -CDC JULIACA -HUMANA JULIACA - CAN JULIACA - CAN CARACOTO - CAN JULIACA - CAN YUNGUYO - CAN JULIACA - CAN AZANGARO - CAN05 PICHICANI -CAN04 PUNO - ALPACA 05 PUNO - CAN 06 JULIACA - CAN 04 PUNO - CAN04 JULIACA - CAN03 SAMAN - CAN DESAGUADERO - CAN05 YUNGUYO - CAN04 ZEP[ITA - CAN 03 DESAGUADERO - GATO03 YUNGUYO - CAN02 POMATA - CAN 02 POMATA - HUMANO05 POMATA - CAN06 POMATA - PORCINO 07 ASCOPE - CAN PIURA -ZORRO 04 PACASMAYO - CAN 03 SADB19M Mxyucdg02 PIURA- CABRA 02 PIURA - CAN 02 PIURA - CAN Mxyucdg95 LAMBAYEQUE - CAN04 LIMA - CAN04 AF045166PerAmaz96 AF070449DesmodusrotundusBr97 SAN MARTIN - CAN

37 Rabia transmitido por murcielagos Ayacucho y Apurimac Lima, San Martin y Lambayeque Pasco - Pozuzo Madre de Dios, Puno (ayacucho 2007, Cusco 2003 Amazonas, Cajamarca y San Martin Desde Amazonas hasta Madre de Dios Relacionado a Murcielagos insectivoros

38 Investigacion - Propuesta Estudio Piloto para determinar nuevos reservorios del virus de la rabia en areas de frontera y enzooticas. Rabia urbana ha disminuido considerablemente, en los ultimos 7 años hay incremento de los casos de rabia silvestre. Casos en animales silvestres (Piura y Madre de Dios)

39 Propuesta de muestreo San Ignacio Cajamarca Ayapata Puno Tambopata Madre de Dios La convencion, Paucartambo Cusco Vilcashuaman, San Miguel Ayacucho Chachapoyas Amazonas Tambogrande Piura Rioja, Moyobamba San Martin

40 Zorros pueden mantener y establecer ciclos independientes de transmision.

41 Gracias por su atención