11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 31/20. Número de solicitud europea: kfecha de presentación:

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1 k 19 OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS ESPAÑA 11 knúmero de publicación: kint. Cl. 7 : A61K 31/ //(A61K 31/ A61K 33:06 A61K 33: A61P 19:08) 12 k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA T3 86 k Número de solicitud europea: kfecha de presentación: k Número de publicación de la solicitud: k Fecha de publicación de la solicitud: k 4 Título: Ácido linoleico conjugado para mantener o aumentar el contenido en minerales de los huesos. kprioridad: US k Titular/es: WISCONSIN ALUMNI RESEARCH FOUNDATION P.O. Box 736 Madison, WI , US k 4 Fecha de la publicación de la mención BOPI: k 72 Inventor/es: Cook, Mark E. y Pariza, Michael W. ES T3 k 4 Fecha de la publicación del folleto de patente: Aviso: k 74 Agente: Tavira Montes-Jovellar, Antonio En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletín europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascículos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, Madrid

2 DESCRIPCION Acido linoleico conjugado para mantener o aumentar el contenido en minerales de los huesos. 1 La presente solicitud se refiere en general al uso de CLA en la preparación de un medicamento para tratar animales, incluidos seres humanos, para mantener o aumentar el contenido de minerales de los huesos. Es conocido que muchos animales, incluidos los seres humanos, pierden minerales de los huesos con la edad o si están aquejados de ciertas enfermedades. Investigadores han observado que la pérdida de calcio de los huesos o reducción en seres humanos puede causar osteosporosis. También es conocido que mantener o aumentar el contenido de calcio de los huesos puede ser beneficioso en tratar o prevenir la osteosporosis. La mayor parte de los compuestos químicos conocidos que mantienen o incrementan el calcio de los huesos en el animal son potentes agentes biológicos que pueden tener significativos efectos secundarios. Sería ventajoso aportar medios de mantener o aumentar el contenido de minerales de los huesos del esqueleto en animales sin causar significativos efectos secundarios indeseables. 2 3 Es un objetivo de la presente invención describir el uso de un ácido linoleico conjugado o una sal no tóxica, un éster activo, un isómero activo, un metabolito activo o una de sus mezclas (las siglas CLA se deben a la expresión inglesa conjugated linoleic acid) en la preparación de un medicamento para administración oral o parenteral para mantener o aumentar el contenido de minerales de los huesos en un animal. También es otro objetivo, describir una composición farmacéutica para mantener y aumentar el contenido de calcio de los huesos que comprenda cantidades inocuas de CLA y una fuente de calcio. Hemos descubierto que el contenido de minerales de los huesos del esqueleto puede mantenerse o aumentar en un animal, incluido un ser humano, por administración al animal de una cantidad inocua y efectiva de un ácido linoleico conjugado, tal como ácido 9,11-octadecadienoico y ácido,12-octadecadienoico, o sus derivados activos, tales como sales no tóxicas, ésteres activos, tales como triglicéridos, y sus mezclas. Los ácidos linoleicos conjugados, sus sales no tóxicas, ésteres activos, isómeros activos, metabolitos activos, y sus mezclas se denominan aquí CLA. Las composiciones de las presente invención son composiciones farmacéuticas que contienen CLA en combinación con una fuente de calcio, tal como carbonato cálcico, y opcionalmente otros ingredientes. 4 0 Será manifiesto para los expertos en la técnica que los objetivos mencionados anteriormente y otras ventajas pueden llevarse a cabo con la práctica de la presente invención. Preferiblemente, para mantener o aumentar el contenido de minerales en los huesos del esqueleto de un animal, se administra una cantidad inocua y efectiva de CLA al animal. Aunque el CLA puede administrarse por sí solo para aumentar o mantener el contenido de minerales en los huesos, las composiciones preferidas de la presente invención son composiciones farmacéuticas que contienen cantidades inocuas de CLA y una fuente de calcio, tal como carbonato cálcico o fosfato cálcico. Las composiciones pueden también contener, sin limitación, diluyentes farmacéuticos y otros ingredientes incluidas vitaminas, tal como Vitamina D, y otros minerales, tales como sales de cinc y de magnesio. La composición farmacéutica puede estar en forma de comprimidos, cápsulas o líquidos para administración oral. Puesto que CLA es un ingrediente natural de la alimentación y es relativamente no tóxico, la cantidad de CLA que se puede administrar no es crítica mientras sea suficiente para ser efectiva. La práctica de la presente invención se ilustra además con los ejemplos que siguen: Ejemplo 1 Pollos de asar de días se alimentaron con dieta convencional de harina de maíz/soja que contenía 0, % de aceite de maíz (control) o 0, % de CLA. Los pollos se alimentaron con las dietas durante 27 días. Los pollos se sacrificaron entonces y se reunieron los huesos, se secaron, se extrajeron con éter y el porcentaje del contenido de cenizas se determinó empleando un horno de tipo mufla. Los resultados en 2

3 tanto por ciento de cenizas de los huesos libres de grasa y secados y de los huesos según se recolectaron se muestran en la Tabla 1. Los pesos corporales y los resultados de la evaluación de los huesos se muestran en la Tabla 2. TABLA 1 Dieta %Humedad %Grasa %Ceniza %Ceniza (peso fresco) 1 Control 44,90±0,93 3,94±0,44,46±0,73 1,11±1,74 CLA 46,22±1,0 4,18±0,43 23,28±1,13 6,32±2, TABLA 2 Dieta Peso corporal Anchura de Anchura de Longitud de TD zanca mm tibia mm tibia cm Puntuación Control 737,±31,41 8,0±0,42 6,07±0,23 6,91±0,11 1,6±0,31 CLA 8,9±29,66 8,43±0,23,91±0, 7,09±0,09 1,3±0, TD= discondroplasia tibial. Las placas de crecimiento de la tibia se examinaron por acumulación de cartílago anormal y se puntuaron 1 si es normal, 2 si está ligeramente aumentado, 3siestá moderadamente aumentado, y 4 si está notoriamente aumentado. Los resultados de los experimentos demuestran que los huesos de los pollos alimentados con la dieta que contiene CLA tienen un mayor contenido de cenizas y contenido de minerales que los pollos control. Resultados similares se obtuvieron en seres humanos. Los usos de la presente invención pueden adoptar diferentes realizaciones. En una realización, el CLA se administra a un animal en una composición farmacéutica o veterinaria que contiene una dosis inocua y efectiva de CLA. En otra realización, el animal se alimenta con comida que ha sido enriquecida con CLA. Los piensos y las preparaciones farmacéuticas para el uso en los métodos de la presente invención son los que contienen el CLA en combinación con el alimento convencional del animal (p.ej. pienso para pollos), suplemento alimenticio para humano, o diluyente farmacéuticamente aprobado. Formas activas de CLA incluyen ácidos linoleicos conjugados libres, isómeros activos de estos ácidos, sus sales no tóxicas, ésteres activos de estos ácidos, tales como triglicéridos, ésteres metílicos y etílicos, y otros de sus derivados químicos activos, y sus mezclas. Los ácidos linoleicos conjugados (CLA) libres se han aislados previamente a partir de carnes fritas y se han descrito como anticancerígenos por Y.L.Ha,N.K.Grimm y M.W.Pariza,en Carcinogenesis, Vol. 8, No 12, pp (1987). Desde entonces, se los ha encontrado en productos como queso fundido (Y. L. Ha, N. K. Grimm y M. W. Pariza en J. Agric. Food Chem., Vol. 37, No 1, pp (1987)). Lasformasdeácidos libres de los CLA pueden prepararse por isomerización de ácido linoleico. Las sales no tóxicas de los ácidos libres de CLA pueden prepararse por reacción de los ácidos libres con una base no tóxica. Los CLA natural también puede prepararse a partir de ácido linoleico por la acción de W 12 -cis, W 11 -transisomerasa de un microorganismo inofensivo tal como la bacteria Rumen Butyrivibrio fibrisolvens. Microorganismos inofensivos en el tracto intestinal de ratas y otros animales monogástricos pueden convertir ácido linoleico en CLA (S. F. Chin, W. Liu, K. Albright and M. W. Pariza, 1992, FASEB J. 6: Abstract N 266). El CLA obtenido según la práctica de los métodos de preparación descritos contiene uno o más de los ácidos 9,11-octadecadienoico y/o,12-octadecadienoico y sus isómeros activos. Puede estar libre o unido químicamente a través de enlaces éster. El CLA es estable frente al calor y puede usarse como 3

4 tal o secado y pulverizado. Los ácidos libres son rápidamente convertidos en una sal no tóxica, tal como las sales sódica, potásica o cálcica, por reacción de cantidades equivalentes químicas del ácido libre con hidróxido alcalino a un ph de aproximadamente 8 a Teóricamente, ocho posibles isómerosgeométricos de los ácidos 9,11- y,12-octadecadienoico (c9,c11; c9,t11; t9,c11; t9,t11; c,c12; c,t12; t,c12 y t,t12) podrían formarse por isomerización de ácido c9,c12-octadecadienoico. Como resultado de la isomerización, solo cuatro isómeros (c9,c11; c9,t11; t,c12; y c,c12) pueden esperarse. Sin embargo, de los cuatro isómeros, los isómeros c9,t11- y t,c12- se producen predominantemente durante la autoxidación o isomerización alcalina del ácido c9,c12-linoléico debido a las características coplanares de los átomos de carbono alrededor del doble enlace conjugado y al conflicto espacial del radical resonante. Los dos c,c-isómeros restantes son contribuyentes menores. La relativa elevada distribución de los t,t-isómeros de los ácidos 9,11- o,12-octadecadienoico resulta aparentemente de la estabilización adicional de los isómeros geométricos c9,t11 o t,c12, que se prefiere termodinámicamente, durante un tiempo de proceso prolongado o período largo de envejecimiento. Adicionalmente, el isómero t,t del ácido 9,11- o,12-octadecadienoico que se formó predominantemente durante la isomerización de los isómeros geométricos del ácido linoleico (ácido t9,t12-, c9,t12- y octadecadienoico) puede influir en la relación final de los isómeros o en el contenido final de CLA en las muestras. Los isómeros geométricos del ácido linoleico también influyen en la distribución del contribuyente menor (isómeros c,c del 9,11- y,12-, ácidos t9,c11- y c11,t12-octadecadienoicos). El isómero 11,13 puede producirse como producto minoritario a partir del ácido c9,c1-octadecadienoico o a partir de sus formas isómeras durante el proceso. El CLA, además de ser añadido al alimento de un animal, puede administrarse bajo la forma de composiciones farmacéuticas o veterinarias, tales como comprimidos, cápsulas, soluciones o emulsiones para el animal o ser humano. La cantidad exacta para administrar, por supuesto, depende de la forma de CLA empleado y de la vía de administración, y de la naturaleza del estado del animal o del ser humano. Generalmente, la cantidad empleada de CLA empleada como un producto farmacéutico estará en un intervalo desde aproximadamente una parte por millón (ppm) hasta aproximadamente.000 ppm de CLA (calculado como ácidos libres) en la dieta humana. Sin embargo, el límite superior de la cantidad a emplear no es crítico porque el CLA es relativamente no tóxico. Las cantidades de CLA (calculada como ácidos libres) para ser añadidas en la comida como un aditivo puede estar en un intervalo desde 0,01 % hasta 2,0 % o más por peso de comida. Las composiciones farmacéuticas preferidas de la presente invención contienen las sales no tóxicas sódicas, potásicas, o cálcicas de CLA en combinación con una fuente de calcio y diluyentes farmacéuticos. Cuando las composiciones están destinadas a la administración oral las formas de dosificación serán preferiblemente un comprimido, una galleta, una cápsula o un líquido. Cuando las composiciones son soluciones o suspensiones destinadas a la administración parenteral, el diluyente preferido será agua estéril para inyección de acuerdo con U.S.P. Las fuentes de calcio que pueden emplearse en las composiciones de la presente invención incluyen, sin limitación, sales, tales como carbonato cálcico, gluconato cálcico y fosfato cálcico. Se prefiere especialmente fosfato cálcico dibásico. Un comprimido farmacéutico representativo tiene la siguiente fórmula: 0 CLA (calculado como ácidos libres) 0 mg Fosfato cálcico dibásico (forma anhidra) 00 mg Colecalciferol (133 UI) 3,33 mcg Celulosa microcristalina, almidón glicolato sódico, almidón de maíz, cera de aceite vegetal hidrogenado, estearato magnésico y talco añadidos. La dosis normal diaria para incrementar o mantener niveles apropiados de calcio en huesos es de tres hasta treinta comprimidos por día. Treinta comprimidos por día es aproximadamente equivalente a la dosis de CLA empleada en el Ejemplo 1. Una representativa galleta farmacéutica masticable tiene la siguiente fórmula: 4

5 1 CLA (calculada como ácidos libres) 00 mg Colecalciferol mcg (0 UI) Fosfato cálcico dibásico, (forma anhidra) Dextrosa, sacarosa, talco, ácido esteárico, aceite mineral, sal, y aromas naturales y artificiales añadidos. La dosis normal diaria es desde dos hasta veinte comprimidos por día. Los veinte comprimidos por día es equivalente aproximadamente a la cantidad de CLA empleada en el Ejemplo 1. Debido a que CLA y sales cálcicas son relativamente no tóxicas, pueden administrarse, si se desea, dosis mayores que las dosis normales diarias de las composiciones. Porlotanto,lainvención está solamente limitada por las reivindicaciones

6 REIVINDICACIONES 1. Uso de un ácido linoleico conjugado o una sal no tóxica, un éster activo, un isómero activo, un metabolito activo o una de sus mezclas (CLA) en la preparación de un medicamento para administración oral o parenteral para mantener o incrementar el contenido de minerales en los huesos en un animal. 2. El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es un triglicérico de un ácido linoleico conjugado El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es una sal sódica de un ácido linoleico conjugado. 4. El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es una sal potásica de un ácido linoleico conjugado.. El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es una sal cálcica de un ácido linoleico conjugado. 6. El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es ácido 9,11-octadecadienoico. 7. El empleo de la reivindicación 1, en el que el CLA es ácido,12-octadecadienoico El empleo de la reivindicación 1, en el que el medicamento comprende un éster activo de un ácido linoleico conjugado. 9. Una composición farmacéutica para mantener e incrementar el contenido de calcio en huesos que comprende cantidades seguras de CLA y una fuente de calcio.. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9, en la que la fuente de calcio es fosfato cálcico dibásico. 11. Una composición farmacéutica de la reivindicación 9, en la que la fuente de calcio es carbonato cálcico. 12. Uso de una fuente de calcio y CLA en la preparación de un medicamento para administración oral y parenteral para mantener o incrementar el contenido de calcio en huesos en un animal NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del , no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos químicos y farmacéuticos como tales. Esta información no prejuzga que la patente esté onoincluída en la mencionada reserva. 6