Carmen Elena Usuga Osorio 1 ; Darío Antonio Castañeda Sánchez 2 y Ana Esperanza Franco Molano 3

Transcripción

1 MULTIPLICACIÓN DE HONGOS MICORRIZA ARBUSCULAR (H.M.A) Y EFECTO DE LA MICORRIZACIÓN EN PLANTAS MICROPROPAGADAS DE BANANO (Mus AAA cv. Grn Enno) (Muscee) MULTIPLICATION OF ARBUSCULAR MYCORRHIZAE FUNGI (AMF) AND MYCORRHIZATION EFFECT IN MICROPROPAGATED PLANTS OF BANANA (Mus AAA cv. Grn Enno ) (Muscee) Crmen Elen Usug Osorio 1 ; Drío Antonio Cstñed Sánchez 2 y An Espernz Frnco Molno 3 Resumen: Se evluó el proceso de multiplicción de hongos que formn micorriz rbusculr (HMA), pr lo cul se usron diferentes tipos de inóculos entre ellos ntivos de groecosistems bnneros del Urbá (Antioqui-Colombi), en sustrto sólido, con diferentes plnts hospeddors y l infectividd y efectividd sobre plnts de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno). L colonizción micorrizl promedio generl de los HMA ls plnts trmp fue de 37,76 ± 21,86 %, con respecto este porcentje, ls plnts B (Brchiri decumbens) y S (Sorgum vulgre) fueron ls que más fvorecieron l simbiosis. Teniendo en cuent el sustrto, el S2 (Aren 50 suelo 50) y el S6 (Vermiculit 50-suelo 50) permitieron expresiones significtivmente myores respecto los demás. El Sorgum vulgre y Puerri phseoloides y en el sustrto S1 (Aren 30 - suelo 70), se encontró un myor número de espors. L combinción plnt-sustrto que más fvoreció l socición fue l plnt trmp B en los sustrtos S2 y S4 (cscrill de rroz 50-suelo50) y l producción de espors fueron ls plnts K y S en el sustrto S1. L socición micorrícic generl en plnts de bnno provenientes de cultivo de tejidos fue de 48,74 ± 30,44. No se encontrron diferencis significtivs (P > 0,05) entre plnts de cero dís con plnts de 30 de climtds. Los inóculos que significtivmente fvorecieron l socición fueron los provenientes de groecosistems bnneros l comprrse con el inóculo comercil y el proveniente de ecosistems nturles del Urbá. El myor peso seco folir y rdicl se encontró en plántuls de bnno inoculds con I5 (Inóculo proveniente de groecosistem bnneros de l zon de estudio). Pr ls vribles de crecimiento no se encontrron diferencis. Abstrct. The process of multipliction of rbusculr mycorrhize fungi (AMF) from indigenous bnn groenvironments from Urbá (Antioqui - Colombi) ws evluted, using solid substrte, with different host plnts nd substrtes, nd the effectiveness of the smples obtined from bnn plnts (Mus AAA cv. Grn Enno ). The verge ssocition of the HMA to the plnts ws 37,76 ± 21,86%, regrding this percentge, the plnts B (Brchiri decumbens) nd S (Sorgum vulgre) fvored grtly the ssocition. Considering the substrte, the S2 (snd 50-soil 50) nd the S6 (Vermiculite 50-soil 50) hd ssocitions significntly superior to tretments. In plnts S nd K (Puerri phseoloides) nd in substrte S1 (snd 30-soil 70), ws found higher number of spores. The combintion plnt-substrte tht most fvored the ssocition ws the plnt B (used s trp culture) using substrtes S2 nd S4 ( cscrill de rroz 50-soil 50) nd the production of spores were plnts K nd S in substrte S1. The generl HMA ssocition in bnn plnts coming from tissue crop ws 48,74 ± 30,44; there were not found significnt differences between plnts with zero dys nd plnts with 30 dys lredy cclimted. The smples with inoculum diseses spred upon them which fvored the ssocition, were the ones coming from the bnn gro-environment compred to the commercil smples nd those from nturl environments in Urbá. The gretest folir dry nd root weight ws found on bnn smplings pplied with I5 (smple from gro-environment). For the growth vribles there ws not found ny difference. Key words: Muss AAA cv. Grn Enno, substrte, growth, cclimte, host plnts, symbiosis. Plbrs clves: Mus AAA cv. Grn Enno, sustrto, crecimiento, climtción, plnt trmp, simbiosis. 1 Investigdor. Politécnico Colombino Jime Isz Cdvid. Fcultd de Ciencis Agrris. A.A. 4932, Medellín, Colombi. <ceusugo@gmil.com> 2 Profesor Ocsionl. Politécnico Colombino Jime Isz Cdvid. Fcultd de Ciencis Agrris. A.A. 4932, Medellín, Colombi. <dcstneds@gmil.com> 3 Profesor Asocid. Universidd de Antioqui. Fcultd de Ciencis Excts Físics y Nturles. A.A. 26, Medellín, Colombi. <frnco@quimby.ude.edu.co> Recibido: Septiembre 13 de 2007; ceptdo: Abril 8 de Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

2 Úsug, C.E.; Cstñed, D.A.; Frnco, A.E. Los hongos que formn micorriz rbusculr (HMA) estblecen socición simbiótic mutulist con l myorí de ls plnts vsculres. El desrrollo de sus estructurs nivel rdicl conllev l funcionlidd de l socición, con un serie de beneficios pr ls plnts en términos de eficienci en l tom de nutrientes del suelo y l resistenci fctores dversos bióticos y bióticos; lo nterior h motivdo l utilizción de este recurso con fines gronómicos, por lo cul se requiere optimizr sus procesos de multiplicción y plicción. En el proceso de multiplicción el crácter de simbionte obligdo por prte del hongo implic el uso de plnts hospeddors con ls cules pued completr su ciclo de vid y finlmente producir espors y/o otros propágulos. L plnt hospeddor debe sembrrse en un sustrto decudo, buscndo obtener lt verstilidd, buen cpcidd de intercmbio ctiónico, ireción y retención de humedd (Hbte y Osorio, 2001). El sustrto demás, debe permitir producción bundnte de propágulos, fácil mnipulción, que se recurso de l zon trbjr y que no se costoso. L plnts de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno) comúnmente son propgds medinte técnics in vitro. A pesr de ls múltiples beneficios de este procedimiento, es reconocid l etp crític cundo se trsfieren condiciones ex vitro, especilmente con índices de lt mortlidd y limitciones pr resistir el estrés del trnsplnte, incluyendo pobre desrrollo de l cutícul, estoms no funcionles, hábitos heterotróficos y pobre desrrollo de ríces (Azcón y Bre, 1997). L totl esterilidd de los medios utilizdos no les permite ls plnts dquirir el estdo micorrícico y sus beneficios (Bre y Azcón, 2002). Adicionlmente l plnt de bnno exhibe un cierto grdo de dependenci con los HMA (Declerck, Plenchette y Strullu, 1995). Ls nuevs propuests biotecnológics sugieren provechr el recurso de l micropropgción, compñd de l inoculción con HMA. (Lovto et l., 1996, Vrm y Schuepp, 1998; citdos por Azcón y Bre, 1997). En este trbjo se desrrollron dos objetivos: el primero, l evlución de diferentes plnts hospeddors y sustrtos en l multiplicción de HMA ntivos de Urbá- Antioqui, Colombi; el segundo, l evlución de l infectividd y efectividd de los inóculos obtenidos sobre plnts de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno) obtenids por multiplicción in vitro, con 0 y 30 dís de tiempo de climtción. MATERIALES Y MÉTODOS Ubicción. El inóculo micorrícico ntivo se obtuvo del muestreo efectudo en el áre bnner conformd por los municipios de Chigorodó, Crep, Aprtdó y Turbo de l región de Urbá, Colombi. Est región se encuentr ubicd en el sector noroccidentl del deprtmento de Antioqui, Colombi 200 km de l ciudd de Medellín, un ltitud promedio sobre el nivel de mr de 40 m. L zon bnner comprende ls cuencs hidrográfics de los ríos Chigorodó, Crep, Vijgul, Zungo, Aprtdó, Riogrnde y Currulo. Ls gus se dirigen de occidente oriente pr encontrrse con el río León que ls conduce hci el Golfo de Urbá. Zons de vid. Ls zons de vid predominntes son: el bosque húmedo tropicl (bh-t) que represent el 40 % de l zon bnner hci l prte norte; el bosque muy húmedo premontno (bmh-pm), donde se sient el 20% de l zon bnner hci l prte centro y, el bosque muy húmedo tropicl (bmh-t) en el cul se ubic el 40% de l zon bnner, en su prte sur. Aspectos climáticos. En cunto precipitción, ls isoyets nules muestrn un umento longitudinl desde los mm, en ls cercnís de Turbo, hst los mm, hci l poblción de Muttá. L zon bnner propimente dich, present en promedio nul de mm. Est precipitción sobreps los requerimientos hídricos del cultivo; sin embrgo, su distribución unimodl, no uniforme lo lrgo del ño, hce que se presente un período de verno de 500 mm entre enero y mrzo. L fluctución diri de l tempertur lo lrgo del ño oscil entre los 46,6 y 19,8 C. L tempertur medi multimensul no tiene vriciones significtivs con un vlor de 26,6 C. El montje de experimentos pr l multiplicción del inóculo y l evlución de los prámetros de socición con ls plnts de bnno, se efectuó en l estción experimentl de l Universidd de Antioqui, situd en el municipio de Medellín (Antioqui-Colombi), con ls siguientes crcterístics climátics: tempertur medi de 22 C, precipitción 4280 Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

3 Multiplicción de hongos micorriz. promedio mensul vrindo lo lrgo del ño entre los 500 y los 2000 mm y humedd reltiv medi de 68%. Muestr. El áre bnner de Urbá (Antioqui, Colombi) pr l époc de muestreo (Agosto de 2004) contb con un totl de 345 fincs, de ls cules se seleccionron letorimente 20. En cd un de ests se escogió un lote igulmente de mner letori de lotes existentes en cd finc. El muestreo fue compuesto, es decir, en cd lote se seleccionron hciendo un recorrido en zig-zg 16 plnts, en cd un de ésts y un distnci de 30 cm del seudotllo y de los primeros 30 cm de profundidd, se tomó un submuestr de 1 kg de l mezcl de suelo más ríces de bnno encontrds. Ls submuestrs se homogenizron en un recipiente myor y se seprron 5 kg de l mezcl de suelo ms ríces. Se identificó decudmente con el número del lote y el nombre de l finc. Ests muestrs se usron como fuente de inóculo ntivo en el proceso de multiplicción de HMA pr evlur los tipos de sustrtos - plnts hospeders y sustrto con ls plnts de bnno (Mus AAA, cv. Grn Enno). Multiplicción de los HMA, Tipos y Combinciones de Sustrtos y Plnts Hospeders Preprción del sustrto. En l preprción del sustrto sólido utilizdo pr l multiplicción de los hongos, se usó suelo proveniente de l mism zon bnner de Urbá donde los HMA ntivos fueron colectdos. Éste inóculo se combinó con tres tipos de mteriles inertes, ren, cscrill de rroz y vermiculit, en proporciones volumen volumen de 70/30 y 50/50 de suelo con cd uno de los mteriles inertes, resultndo sí, un totl de seis mezcls de sustrtos (Tbl 1). Ls crcterístics químics del suelo fueron: ph 5,2; mteri orgánic 4,7%; fósforo 27 mg kg -1 ; zufre 6 mg kg -1 ; hierro 317 mg kg -1 ; mngneso 29 mg kg -1 ; cobre 6 mg kg -1 ; zinc 3 mg kg - 1; luminio 0,4 cmol kg -1 ; clcio cmol kg -1 ; mgnesio 5,2 cmol kg -1 ; potsio 1,86 cmol kg -1 y presentó un cpcidd de intercmbio ctiónico de 19,6 cmol kg -1. L textur del suelo fue frnco renoso. Tbl 1. Trtmientos obtenidos por l combinción de cutro niveles del fctor plnt hospeddor, tres tipos de mteriles inertes con dos niveles cd uno, pr el estudio de l multiplicción de hongos micorriz rbusculr (HMA) y el efecto en l micorrizción en plnts micropropgds de bnno. Sustrto Brchiri decumbens (B) Plnt hospeder Puerri Sorgum phseoloides vulgre (K) (S) Proporción % (v/v) Proporción Código Trtmientos Tjetes erect (T) Suelo Cscrill rroz S4 T1 T2 T3 T4 50 Aren S2 T5 T6 T7 T8 50 Vermiculit S6 T9 T10 T11 T 30 Cscrill rroz S3 T13 T14 T15 T16 30 Aren S1 T17 T18 T19 T20 30 Vermiculit S5 T21 T22 T23 T24 Los sustrtos se esterilizron tres veces durnte un hor 0 C, 15 librs de presión cd 24 hors; l finl de este proceso se psó trvés de un tmiz con un tmño de poro de 2 mm. Inoculción de los HMA. En mteros plásticos de 22 cm de diámetro y 18 cm de profundidd se vertieron 3 kg de sustrto por 3 mteros de cd un de ls mezcls de los sustrtos preprdos. Se utilizó como inóculo un muestr compuest de todos los lotes colectdos en l zon bnner de Urbá. El inóculo estb compuesto de suelo más ríces de bnno y se le determinó un nivel bsl de 2 espors por grmo de suelo, siguiendo el método de decntdo, tmizdo, y centrifugción propuesto por Sieverding (1983). A cd unidd con su respectivo sustrto, se le dicionó en l prte superior 200 g del inóculo ntivo (suelo más ríces de bnno). Mteril vegetl. Como plnts trmp se usron: Brchiri decumbens (B), Puerri phseoloides K), Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

4 Úsug, C.E.; Cstñed, D.A.; Frnco, A.E. Sorgum vulgre (S), y Tgetes erect (T) (Tbl1). Ests, se sembrron prtir de semill comercil pregermind sobre ppel humedecido en recipientes plásticos, y cubriéndols con un cp superficil de l mezcl del respectivo sustrto preprdo e inoculdo con los HMA ntivos. Se not, que los porcentjes de germinción presentdos fueron de 70, 66, 16 y 14%, respectivmente y se estimó colocndo 100 semills sobre ppel húmedo en cjs de Petri. Mntenimiento. Durnte los cinco meses siguientes l siembr (noviembre de 2004 bril de 2005), ls plnts se sometieron riego, mnteniendo el suelo cpcidd de cmpo y sin ningún tipo de fertilizción. Después de los cinco meses (myo de 2005) y durnte15 dís se suspendió el riego pr provocr estrés hídrico en ls plnts hospeddors e inducir l esporulción de los HMA (Sieverding, 1991). Evlución de l Asocición de los Hm con Plnts Micropropgds de Bnno (Mus AAA cv. Grn Enno) Sustrto. Se prepró un mezcl con el suelo descrito y ren, en un proporción 70:30 volumen volumen, respectivmente. Los sustrtos se esterilizron tres veces durnte un hor 0 C, 15 librs de presión cd 24 hors; l finl de este proceso se psó trvés de un tmiz con un tmño de poro de 2 mm. El sustrto se esterilizó, bjo ls misms condiciones enuncids de tempertur, tiempos y ciclos de exposición, l finl del proceso el sustrto se psó trvés de un tmiz de tmño de poro de 2 mm. Inóculo. Se evluron cinco tipos de inóculos, de los cules tres de ellos fueron preprdos prtir de un inóculo ntivo del groecosistem bnnero de Urbá, Colombi; multiplicdos en tres sustrtos diferentes (suelo/ren, suelo/cscrill de rroz y suelo/vermiculit), otro se obtuvo de un ecosistem nturl (sin intervención ntrópic) colectdo en el municipio Chigorodó de l región de Urbá- Colombi, multiplicdo en el sustrto suelo-ren 70/30 volumen volumen, con l plnt hospeddor Brchiri decumbens y un inóculo comercil utilizdo en l zon. Cd inóculo fue crcterizdo con los géneros de HMA presentes teniendo en cuent crcteres morfológicos y el número de espors por grmo de suelo húmedo siguiendo el método de decntdo, tmizdo, y centrifugción propuesto por Sieverding (1983) (Tbl 2). Tbl 2. Tipos de inóculos utilizdos en l evlución de l socición con plnts de bnno; crcterizdos por su procedenci, géneros, sustrto de multiplicción y número de espors. Procedenci Especies Sustrto de multiplicción Glomus (G. ggregtum, Suelo:ren (70:30% Inóculo ntivo de G. geosporum, G. clrum), v/v) groecosistem Aculospor (A. morrowie, Suelo: cscrill rroz bnnero A. melle, A. gerdermnnii), (70:30% v/v) (S. clospor) y Entrophospor Suelo vermiculit (70:30% v/v) Inóculo de ecosistem Aculospor spp., Glomus spp., Suelo:ren (70:30% nturl (Urbá) Entrophospor spp. v/v) Inóculo comercil Glomus sp., Aculospor sp., Scutellospor sp. y Entrophospor Espors Inóculo g -1 de suelo Inoculción. En vsos blncos de polietileno de 8 cm de diámetro y 10 cm de profundidd, se vertieron 500 g del sustrto preprdo. En l superficie de éste, se dispersó el inóculo (suelos más ríces) que contení 500 espors por vso; por trtmiento se tuvieron 3 repeticiones. Como testigo se dejron tres vsos con el sustrto sin l dición de ningún tipo de inóculo. Mteril vegetl. Se utilizron plnts micropropgds de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno) procedentes del lbortorio de biotecnologí vegetl de l Universidd Ctólic de Oriente (Antioqui, Colombi). Se evluó l respuest de plántuls micropropgds sin climtr, es decir extríds del medio de cultivo y sembrds directmente en cd uno de ls mezcls de sustrtos 4282 Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

5 Multiplicción de hongos micorriz. inoculdos con los diferentes tipos de inóculos y de plnts con 30 dís de inicido el proceso de climtción, ls cules se encontrbn en un sustrto compuesto por ren l 100% y se trnsplntron cd un de ls mezcls inoculds nteriormente mencionds. Mntenimiento. Ls plnts se mntuvieron bjo condiciones de inverndero durnte un período de 60 dís, tiempo durnte el cul únicmente se dicionó gu y no se plicó ningún tipo de fertiliznte (Aris, Blnco y Vrgs, 1999). Medicion de vribles respuest. Tnto en el cso de ls plnts trmps como de ls plántuls de bnno, se midió colonizción de ls ríces por los HMA en un muestr de 2 g de ríces extríds. L colonizción se evluó por l observción de ríces, l microscopio de luz, previmente decolords con KOH 10% y teñids con zul de tripno como lo describen Phillips y Hymnn (1970), modificd pr bnno (Usug y Frnco, 2002); L colonizción se clculó por el método en lmins de Sieverding (1983). Adicionlmente se evluó el número de espors por grmo de inóculo por el método de decntdo, tmizdo, y centrifugción propuesto por Sieverding (1983), prtir de un muestr de 100 g. Tmbién se cuntificó el número de nemátodos por grmo de suelo por el método de flotción y centrifugción en zúcr (Montecinos y Frnco, 1993) con el fin de evlur su clidd snitri. Al finl del experimento ls plántuls de bnno se les determinó el peso seco tnto de l prte ére como rdicl; tmbién se determinó con un frecuenci semnl, l ltur, el diámetro del pseudotllo de ls plántuls y l ts de emisión folir. Diseño Experimentl Multiplicción de HMA. Pr l evlución de l multiplicción de los HMA se montó un rreglo fctoril 2 X 6 X 4, en donde los fctores fueron tipo de sustrto, tipo de plnt hospeddor y de sustrto el fctor tipo de sustrto contó con 6 niveles, obtenidos por l combinción de suelo proveniente de l zon bnner de l región de Urbá y mteriles inertes ren, cscrill de rroz y vermiculit en proporciones 70: 30 y 50: 30 (S1 suelo: ren 70:30, S2 suelo: ren 50:50, S3 suelo: cscrill de rroz 70:30, S4 suelo: cscrill de rroz 50:50, S5 suelo: vermiculit 70:30 y S6 suelo: vermiculit 50;50). El fctor plnt hospeddor involucró 4 niveles o tipos de plnts trmp: Brchiri decumbens (B), Puerri phseoloides (K), Sorgum vulgre (S) y Tgetes erect (T). L combinción de cd uno de los niveles de los diferentes fctores, generron 24 trtmientos evludos en tres repeticiones y distribuidos letorimente dentro del inverndero. Evlución de l socición de los HMA con plnts micropropgds de bnno. L socición de los HMA con plnts micropropgds de bnno se evluó medinte un rreglo de fctores 5 x 2. En donde los dos fctores fueron tipo de inóculo y tiempo de inoculción. En el tipo de inoculo se probron 5 niveles. El inóculo I1 correspondió l proveniente de ecosistem nturl multiplicdo en suelo: ren en proporción 70: 30, el I2 correspondió inóculo comercil y los inóculos I3 I5 los provenientes de groecosistems bnneros multiplicdos en los sustrtos suelo: vermiculit, suelo: cscrill de rroz suelo:ren, todos en l proporción 70 : 30. El tiempo de inoculción contó con dos niveles: los cero dís y 30 dís de inicido el proceso de climtción. En nálisis estdístico completo de los dtos, se utilizó el softwre R, versión 2.4 ño RESULTADOS Respuest de los HMA los Tipos y Combinciones de Sustrtos y Plnts Trmp Porcentje de colonizción. L socición generl expresd en porcentje de los HMA sobre ls plnts hospeddors fue de 37,76 ± 21,86%. Se discriminó de cuerdo l plnt e independien-temente del sustrto usdo, ls plnts B (Brchiri decumbens) y S (Sorgum vulgre) presentron los más ltos porcentjes de colonizción con 46,61 ± 19,41 y 44,84 ± 18,67 % respectivmente. De cuerdo l sustrto e independientemente de l plnt trmp los que mejor fvorecieron l socición ls plnts fueron el S2 (suelo 50: ren 50) y el S6 (suelo 50: vermiculit 50) con porcentjes de 49,97 ± 16,37 y 43,52 ± 23,64% respectivmente. El sustrto S3 (suelo 70: cscrill de rroz 30) fue el que menos fvoreció l socición con 25,162 ± 17,41 % (Tbl 3). Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

6 Úsug, C.E.; Cstñed, D.A.; Frnco, A.E. De cuerdo con el nálisis de vrinz relizdo, se encontrron diferencis significtivs tnto por los fctores plnt hospeddor y sustrto como por l intercción de los dos. Usndo l prueb de Tukey pr ls medis de los porcentjes de socición, se estblecieron pr el fctor plnt hospeddor tres grupos, cuyos promedios presentn diferencis significtivs entre sí pero homogénes dentro del grupo. Así, un grupo se conformó por ls plnts B y S; ls plnts K y T formron cd un un grupo independiente y diferente de ls demás. En el cso del sustrto se estblecieron cutro grupos; uno se constituyó por los sustrtos S1, S4 y S5; los sustrtos S2 y S6 formron otro grupo y el sustrto S3 se ubicó independientemente de los demás (Tbl 4). Tbl 3. Estdísticos descriptivos pr ls vribles respuest, porcentje de colonizción de hongos micorriz rbusculr (HMA) y número de espors de cuerdo l plnt hospeddor y el sustrto. Donde, B: Brchiri decumbes, K: Puerri phseoloides, S: Sorgum vulgre y T: Tjetes erect; S1 S6 los sustrtos obtenidos por l mezcl de suelo y mteriles inertes en diferentes proporciones. Vrible respuest Asocición (%) Espors/100 g ss Fctor Niveles N Mínimo Promedio Medin Máximo Rngo Desvición estándr B 18 15,2 49,0 46,6 93,4 78,3 19,4 Plnt K 18 5,1 36,6 33,6 69,6 64,5 20,1 hospeder S 18 6,7 44,8 45,8 86,4 79,6 18,7 T 18 1,6 20,6,4 64,0 62,4 19,0 Sustrto Plnt hospeder Sustrto S1 S2 S3 S4 S5 S6 B K S T S1 S2 S3 S4 S5 S ,5 22,5 1,6 4,1 7,7 10,9 519,0 547,0 358,0 174,0 454,0 336,0 322,0 174,0 626,0 665,0 36,6 50,0 25,2 36,2 35,1 43,5 965,8 1470,6 1617,9 678,7 1790,8 1114,9 723,3 586,8 1495,3 1388,3 38,5 51,1 26,7 26,8 42,2 49,7 908,5 1440,5 1634,0 540,5 1842,5 1159,0 692,0 582,0 1435,0 1399,5 50,0 70,0 50,4 93,4 63,4 73,7 1747,0 2862,0 3307,0 2341,0 3307,0 1876,0 1026,0 1011,0 2341,0 2386,0 28,5 47,5 48,8 89,4 55,7 62,8 28,0 2315,0 2949,0 2167,0 2853,0 1540,0 704,0 837,0 1715,0 1721,0 8,8 16,4 17,4 34,5 17,3 23,6 296,8 725,1 818,1 517,5 1081,4 527,8 242,6 265,5 552,8 522,9 Coeficiente de Vrición 0,4 0,6 0,4 0,9 0,3 0,3 0,7 1,0 0,5 0,5 03, 0,5 0,5 0,8 0,6 0,5 0,3 0,5 0,4 0,4 Tbl 4. Comprciones múltiples de Tukey pr ls medis de los porcentjes de socición de hongos micorriz rbusculr (HMA) y número de espors de los diferentes niveles de los fctores plnt hospeddor y sustrto. Fctor Nivel Asocición (%) Prueb Tukey (P 0,05) Espors 100 g ss Prueb Tukey (P 0,05) Plnt hospeder B K S T 49,0 36,6 44,8 20,6 b c b c Sustrto S1 S2 S3 S4 S5 S6 36,6 50,0 25,2 36,2 35,1 43,5 Donde, B: Brchiri decumbes, K: Puerri phseoloides, S: Sorgum vulgre, y T: Tjetes erect; S1 S6 los sustrtos obtenidos por l mezcl de suelo y mteriles inertes en diferentes proporciones. b c b b c c d bd 4284 Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

7 Multiplicción de hongos micorriz. L plnt B en combinción con los sustrtos S2 y S4 tuvieron un efecto positivo en l socición promedi con porcentjes de 67% y 75%, respectivmente. L plnt S en el sustrto S6 presentó un socición positiv y similr l plnt K en el mismo sustrto con porcentjes del 63% igulmente, ls plnts T en el sustrto S2 y l S en el sustrto S4 presentron sociciones similres con un porcentje del 58 %. Ls demás combinciones de plnts trmp sustrto no tuvieron un efecto significtivo en los porcentjes de socición respecto l medi generl, oscilndo l rededor de est en unos csos o con porcentjes inferiores en otros (Figur 1). 100,00. b. 4000,00 Asocición (%) 80,00 60,00 40,00 20,00 B K S T Espors (No/100 g de suelo) 3500, , , , , ,00 500,00 B K S T 0,00 S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 Sustrto 0,00 S0 S1 S2 S3 S4 S5 S6 Sustrto Donde, B: Brchiri decumbens, K: Puerri phseoloides S: Sorgum vulgre, y T: Tgetes erect; S1 S6 los sustrtos obtenidos por l mezcl de suelo y mteriles inertes en diferentes proporciones. Figur 1. Efecto de l intercción entre el tipo de plnt hospeddor y sustrto en él. ) Asocición micorrícic; b) Número de espors. Número de espors. El número de espors promedio generl producido fue de 1.183,25 ± 718,00. Ls plnts hospeddor que más producción de espors indujeron sin tener en cuent el sustrto fueron S y K, en el mismo orden con 1.617,89 ± 818,07 y 1.470,61 ± 75 espors por 100 g de suelo; l plnt T fue l que menos fvoreció l producción con 678,67 ± 517 espors por 100 g de suelo. De cuerdo l sustrto e independientemente de l plnt trmp, el S1 fue en el que más espors se produjo con 1.790,75 ± 1081,39 espors por 100 g de suelo; en los sustrtos S3 y S4 se encontró el menor número de espors por 100 g de suelo con 723, 33 ± 242,64 y 586, 83± 265, 48 respectivmente (Tbl 3). El nálisis de vrinz permitió estblecer diferencis significtivs debids los fctores plnt hospeddor y sustrto, sí como diferencis por l intercción de los dos fctores. L prueb de comprciones múltiples de Tukey usd pr estblecer ls diferencis entre ls medis de los niveles de cd fctor permitió estblecer grupos; en el cso del fctor plnt trmp, ls plnts K y S se ubicron en un grupo, l B y l T conformron cd un un grupo independiente y diferente de ls demás (Tbl 4). De cuerdo l tipo de sustrto, no presentron diferencis significtivs S1 con S5; ni, S2 con S6; tmpoco S5 con S6; ni S3 con S4; ls demás combinciones posibles presentron promedios de espors diferentes (Tbl 4). El efecto en el número de espors obtenido por l combinción de l plnt hospeddor y el sustrto fue positivo pr ls plnts K y S, mbs en el sustrto S1; cuyos promedios fueron de y espors por 100 g de suelo. Tmbién se observó pr ests dos plnts un efecto positivo unque menor cundo se colocron en los sustrtos S2, S5 y S6, que oscil entre ls y espors por 100 g de suelo. El efecto de l combinción de l plnt T con cd uno de los sustrtos en generl tuvo un comportmiento negtivo, ls demás combinciones de plnts y sustrtos oscilron l rededor del promedio generl, (Figur 1b). Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

8 Úsug, C.E.; Cstñed, D.A.; Frnco, A.E. Colonizción Micorrícic en Plnts de Bnno (Mus AAA cv Grn Enno), Procedentes de Cultivo de Tejidos. Colonizción micorrícic. L socición micorrícic generl fue de 48,74 ± 30,44 y no se presentron diferencis significtivs entre plnts con cero y treint dís de climtción (Figur 2). Con respecto l inóculo, se encontrron diferencis significtivs en el porcentje de socición promedio. Se usó l prueb de Tukey, estbleciéndose los siguientes grupos, uno conformdo por los inóculos, I3, I4 e I5 (provenientes de groecosistems), entre los cules no se encontró diferencis significtivs, y los inóculos I2 (inóculo comercil) e I1 (proveniente de ecosistem nturl) conformron cd inóculo un grupo independiente (Tbl 5). Peso seco folir y rdicl. El peso seco folir de ls plántuls de bnno, respondieron signi-fictivmente l tipo de inóculo usdo, sin embrgo, de cuerdo con l prueb de Tukey se formron dos grupos, uno conformdo por los inóculos I1, I2, I3 e I5, y otro formdo por el inóculo I4, en el cul se encontró el myor peso folir (Figur 3 )). En el cso del peso seco de ríz, de nuevo en el inóculo I4 fvoreció el peso seco de l ríz (Figur 3 b)); no obstnte, no fue diferente de I5, I3 e I2, (Tbl 5). 100 Asocición (%) AS AS 0 I1 I2 I3 I4 I5 Inóculo Figur 2. Comportmiento de l colonizción micorrícic (%) en plnts de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno), con cero y 30 dís de climtción bjo cinco tipo de inóculo. Tbl 5. Comprciones múltiples de Tukey pr ls medis de los porcentjes de colonizción de hongos micorriz rbusculr (HMA) en plnts de bnno bjo los diferentes tipos de inóculo. Inóculo AS % Prueb Tukey (P 0,05) PSF g Prueb Tukey (P 0,05) PSR g Prueb Tukey (P 0,05) I1 0,697 c 0,783 b 1,750 b I2 37,250 b 1,050 b 2,033 b I3 60,068 1,083 b 2,083 b I4 67,453 1,417 3,283 I5 78,230 1,100 b 2,650 b Donde: AS: socición de HMA en porcentje, PSF: peso seco folir, PSR: peso seco ríz. Altur de l plnt, diámetro y emisión folir. El nálisis de ls curvs promedio de crecimiento pr ls vribles ltur, diámetro y emisión folir, no presentron diferencis significtivs, dtos no mostrdos. DISCUSIÓN En l evlución de sustrtos pr l multiplicción de inóculos de HMA por el método de Sustrto Sólido, generlmente se busc un 4286 Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

9 Multiplicción de hongos micorriz. medio que proporcione ireción, bj proporción de nutrientes disponibles que no inhibn el estblecimiento de l socición y libre de ptógenos. En estudios relizdos se hn utilizdo diferentes tipos de sustrtos, en donde lgunos hn proporciondo buenos resultdos y otros como lguns turbs y sustrtos compuestos, efectos negtivos (Jizme y Rodríguez, 2004). En este experimento los sustrtos que mejor fvorecieron l socición de HMA sobre l plnt hospeder fueron el S2 ren 50) y el S6 (vermiculit 50), no obstnte desde el punto de vist de costos de los mteriles inertes, sí como de fcilidd de obtención, el sustrto S2 result ventjoso sobre el S6. L proporción de sustrto/suelo que más fvoreció l respuest en porcentje de colonizción de ríces fue l proporción volumen volumen 50/50. El sustrto S3 (suelo 70: cscrill de rroz 30) no fvoreció l socición micorrícic, ni l producción de espors probblemente porque l proporción y clidd del mteril inerte diciondo no fue suficiente pr generr uns propieddes físics decuds del sustrto y evidencido en el mejor comportmiento del sustrto S6 cuy únic diferenci fue l proporción del mteril inerte diciondo.. b. 1,50 4 1,00 3 Peso (g) 0,50 PF 0 PF 30 Peso (g) 2 PR 0 PR ,00 I1 I2 I3 I4 I5 0 I1 I2 I3 I4 I5 Inóculo Inóculo Figur 3. Comportmiento del peso seco del sistem folir (PF) ) y rdicl (PR) b), de plnts de bnno (Mus AAA cv. Grn Enno) con cero y 30 dís de climtción, bjo cinco tipos de inóculo. L plnt hospeddor que mejor fvoreció l socición micorrícic independientemente del sustrto fue l B; sin embrgo, su comportmiento respecto l número de espors, fue contrrio. Un comportmiento inverso presentó l plnt K, l cul fvoreció l producción de espors y no sí l socición. Es frecuente encontrr un comportmiento inverso entre l socición y l producción de espors, es decir cundo un plnt fvorece l socición micorrícic, l producción de espors puede comprometerse y vicervers. Si se tienen presentes ls crcterístics del inóculo usr, es decir l producción de un inóculo compuesto de espors enriquecido con ríces de l plnt hospeddor, fue l plnt S l que fvoreció tnto l colonizción micorrícic como l producción de espors. Estos resultdos positivos obtenidos con el Sorgum vulgre se poyn en el trbjo práctico desrrolldo por el INVAM (Colección Nortemericn de Hongos Formdores de Micorriz Arbusculr). Allí se h utilizdo est plnt rutinri en el bnco de germoplsm, considerd como excelente hospeder pr un mplio rngo de HMA en condiciones de inverndero; sin embrgo, pueden no comportrse como óptimos en tods ls regiones geográfics. Adicionlmente se consider un buen plnt hospeddor utilizd en suelos ntivos, o en poblciones de hongos heterogéneos u homogeneos en cultivos grnel, por poseer un sistem rdicl más vigoroso y sus semills menos susceptibles l estrés por trnsplnte (Morton, Bentiveng y Wheeler, 1993). En l producción de HMA, ls vribles porcentje de colonizción y número de espors Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

10 Úsug, C.E.; Cstñed, D.A.; Frnco, A.E. pueden evlur el inóculo obtenido, como se observ en este experimento. L producción de ls especies ntivs de HMA de groecosistems bnneros del Urbá muestrn resultdos diferentes pr ests vribles en l obtención de propágulos (ríces, espors), dependiendo de l plnt hospeddor o del sustrto. De est mner si el interés es producir ríces colonizds deberá utilizrse l B (B. decumbens) y si es pr obtener espors, el S (S. vulgre) present mejores resultdos. Es importnte resltr que un inoculo con solo ríces colonizds como propágulos infectivos, es de excelente clidd siempre y cundo se utilice de inmedito, porque sin l plnt viv, el micelio colonizdor muere en pocs semns, ún lmcendo en un mbiente fresco (Hss y Krikum, 1985). Pr este cso, l multiplicción por el método de Sustrto Solido implic un selección de un sistem de propgción conformdo por un plnt hospeddor y un sustrto. Así l plnt B en sustrto S2 y S4 es un sistem que fvorece l producción de ríces y l plnt S en sustrto S1 fvorece l producción de espors. Lo nterior reflej un tendenci en los resultdos pr l producción de inóculos de HMA, bien se ríces colonizds o espors de HMA. De est mner se cept que pr l multiplicción de HMA en Sustrto Sólido no solo debe tenerse en cuent el sustrto y l proporción utilizr sino demás l plnt hospeddor que se sembrr sobre este, convirtiéndose en un sistem de multiplicción (sustrto-plnt) propio pr cd cso. L plnt trmp T (T. erect) prece no ser decud l menos pr el inóculo, condiciones y sustrtos trbjdos tnto en l colonizción como en l inducción de l producción de espors. Con relción l tiempo de inoculción con HMA sobre plnt micropropgds, existen tres estdios en que podrí relizrse: in vitro, ex vitro durnte fse de enrizmiento l inicio de climtción y ex vitro en climtción o fse de vivero (Vestberg y Estún, 1994). Se hn publicdo vrios estudios descriptivos de experimentos que evlún l inoculción ex vitro l inicio y l finl de l etp de climtción en plántuls de vid, frmbues, pltner, piñ, fres, per, entre otrs y l comprr lo que trd l inoculción l comienzo de l climtción o l principio de l etp de endurecimiento, se h visto que en lgunos csos, se produce un mejor respuest de l plnt cundo l inoculción tiene lugr l principio de l etp de endurecimiento (Vidl et l., 1992; Azcón et l., 1992). En plnts de plátno los estudios muestrn un buen resultdo l combinr l multiplicción in vitro compñd de l micorrizción temprn, optimizndo el enrizmiento y el desrrollo de l microplántul (Jizme y Azcón, 1995; Jizme et l., 2002; Jizme y Rodríguez, 2004). Los resultdos de este experimento muestrn un buen comportmiento pr l inoculción ex vitro sin diferencis significtivs l inoculr el dí 0 ó 30 dís de est etp, esto indic que ls plántuls cundo slen del lbortorio cuentn y con un sistem rdicl suficientemente desrrolldo pr fcilitr un socición decud. Sin embrgo, pr experimentos posteriores se recomiend evlur un diferenci en tiempo más mrcd e igulmente un evlución de los prámetros de crecimiento y desrrollo durnte myor tiempo. Adicionlmente, en términos de mno de obr, l inoculción puede ser ejecutd simultánemente con l preprción del sustrto pr l climtción de ls plnts in vitro consumiendo menor tiempo. En cunto los inóculos evludos fueron los ntivos de groecosistems bnneros (I3, I4 e I5) los que myores vlores de colonizción micorrizl lcnzron; el inóculo comercil (I2) y el de ecosistem nturl (I1) presentron vlores de colonizción mucho menores que los nteriores. Teniendo en cuent que el sustrto de crecimiento utilizdo fue suelo del Urbá, crcterístico del groecosistem de bnno, ls ceps provenientes de groecosistems se dptron mejor dichs condiciones reflejdo en myores porcentjes de colonizción. Así mismo, Bolños (1998) consider que existen condiciones ecológics que ejercen myor influenci sobre l 4288 Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

11 Multiplicción de hongos micorriz. distribución de ls especies de HMA como ls propieddes físico-químics del suelo, y que existe un plntemiento biogeográfico donde cd especie tiene crcterístics propis y funciones dptds un medio edáfico prticulr. Aunque no hubo diferencis significtivs entre los inóculos pr ls vribles de crecimiento y desrrollo (ltur, diámetro del pseudotllo y emisión folir), si se presentó diferencis pr vribles del peso seco folir y de ríces, mostrndo mejores resultdos el inóculo I4 (proveniente de groecosistems, en sustrto ren). Los resultdos obtenidos en este experimento indicn que l inoculción con HMA l inicio de l climtción es benéfic porque se colonizn ls ríces en desrrollo y se obtienen los beneficios de l simbiosis desde un etp temprn. Además que l inoculción de ceps ntivs del mismo groecosistem, se convierte en un práctic gronómic potencil l considerr los costos de inóculos foráneos y el impcto ecológico de l mnipulción de ceps de un mbiente otro. AGRADECIMIENTOS Se grdece los investigdores Crlos Alberto Rivills Osorio (Cenicfé) y Mrí del Crmen Jizme Veg (Instituto Cnrio de Investigciones Agrris, Tenerife, Espñ) por su sesorí y portes cdémicos. Al Centro de Investigciones del Bnno (Cenibnno) y l Universidd de Antioqui, por el poyo finnciero y logístico. BIBLIOGRAFÍA Aris, F., F. Blnco y R. Vrgs Evlución de l infectividd de micorrizs rbusculres en plnts micropropgds de bnno (Mus AAA, cv. Vlery) durnte fses de inverndero y vivero. Corbn 25(52): Azcón-Aguilr, C., A. Brcelo, M.T. Vidl nd G. Delvin Further studies on the influence of mycorrhiz on growth nd development of micropropgted vocdo plnts. Agronomie (10): Azcon-Aguilr, C. nd J.M. Bre Applying mycorrhiz biotechnology to horticulture: significnce nd potentils. Sci. Hort. 68(1-4):1-24. Bre, J.M., y C. Azcón-Aguilr Técnic de elborción y control de clidd de inoculntes micorrizicos. Deprtmento de Microbiologí de Suelos y Sistems Simbióticos, Estción Experimentl del Zidin, CSIC, Grnd, Espñ. Bolños, M.M Condiciones ecológics que influyen sobre l poblción de endomicorrizs en l zon cfeter. p.0-1. En: Memoris IX Congreso Colombino de l Cienci del suelo. Octubre Pip, Colombi. Declerck, S., C. Plenchette nd D.G. Strullu Mycorrhizl dependency of bnn (Mus cumint, AAA group) cultivr. Plnt Soil. 176(1): Hbte, M. y Osorio, N.W Arbusculr mycorrhizs: producing nd pplying rbusculr mycorrhizl inoculum. CTAHR, College of Tropicl Agriculture nd Humn Resources, University of Hwii t Mno, Honolulu, Hwii. p Hss, J.H., J. Krikum Efficcy of endomycorrhizl-fungus isoltes nd inoculums quntities required for growth response. New Phytol. 100(4): Jizme Veg, M.C, y A.S. Rodríguez Romero Uso de ls micorrizs en bnno: logros y perspectivs En: Memoris XVI Reunión Interncionl ACORBAT. Oxc, México. Jizme Veg, M.C y R. Azcon Responses of some tropicl nd subtropicl cultures to endomycorrhizl fungi. Mycorrhiz 5(3): Jizme Veg, M.C, M. Esquivel Delmo, P. Tenoury Dominguez, y A.S. Rodriguez Romero Efectos de l micorrizcion sobre el desrrollo de dos cultivres de plntner micropropgd. Infomus 11(1): Lovto, P.E., V. Gininzzi-Person, A. Trouvelot nd S. Gininzzi The stte of rt of mycorrhiz. nd micropropgtion. Adv. Hortic. Sci. 10: Citdos por Azcon-Aguilr, C. nd J.M. Bre Applying mycorrhiz biotechnology to horticulture: significnce nd potentils. Sci. Hort. 68(1-4):1-24. Montecinos, R. y J. Frnco Dignóstico de los principles nemtodos del cultivo de pp. Mnul Técnico. Instituto Bolivino de Tecnologí Agropecuri, IBTA, Cochbmb, Bolivi. 26 p. Rev.Fc.Nl.Agr.Medellín 61(1):

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